目录 中文摘要.............................................................#.1 英文摘要...............................................................3 缩略词表..............................................................6 前言......................................................................8 实验材料..............................................................10 实验方法.............................................................13 实验结果..............................................................18 讨论....................................................................28 小结...................................................................32 参考文献.............................................................33 综述.....................................................................36 附录硕士期间参与的工作及发表的报告.....................44 致谢...................................................................45XAGE一lb辅助诊断原发性肝癌的可行性研究 摘要 XAGE一l是Brillklnann和Vasmatzis等人于1999年利用同源漫步(homologous walking)的生物信息学方法在人类EST库中搜索GAGE一PAGE的近缘基因时发 现的一类新基因,定位于XPH.ZI一XPll.22,限制性地表达于健康皋丸组织及多 种肿瘤中,是典型的CT-X抗原XAGE一1的表达剪接体有4种,最主要的是 XAGE一lb临床研究已获得了较为详细的XAGE一lb在肿瘤中的表达谱,发现在 肺癌!黑色素瘤!前列腺癌等癌症组织中有较高的XAGE一lb检出率,并且逐步 揭示出XAGE一lb表达与病理进程和肿瘤亚型间的关联本研究通过检测 XAGE一lb在原发性肝癌(PHc)人群!肝炎肝硬化人群!良胜肝病人群!健康 人群中的表达,了解其是否可作为PHC诊断及预后判断的指标 目的:评价XAGE一lb作为PHC辅助诊断指标的可行性 方法:采用Real一timeRl.-PCR的方法定量检测125例PHC!23例肝炎肝硬 化!34例良陛肝病!41例健康志愿者血液中XAGE一lbmRNA表达,探讨其表 达与PHC患者性别!年龄!肿瘤大小!病理类型!临床分期!AFP的关系,比 较其在不同人群中表达差异,并用ROC曲线比较XAGE一lbmRNA!AFP!CEA! CA199诊断PHC的价值;进一步检测18例PHC癌组织!癌旁组织XAGE一lb mRNA表达水平并比较其表达差异,采用免疫组化S一P法对100例PHC癌组织 和癌旁组织进行染色,研究XAGE一lb蛋白表达 结果:125例PHC患者血液XAGE一lbmRNA检出率为80.8%其中男女患 者检出率分别为80.58%,81.82%(产)0.05),各年龄组(20一39岁!40一59岁! 60一79岁)检出率分别为90.0%,77.9%,82一%(冷0.05)血液XAGE一bmRNA 的表达水平在大肝癌组(肿瘤直径>scm)和小肝癌组(肿瘤直径〔scm),肝细 胞癌组和胆管细胞癌组,临床工!11!111!W期组,AFP阳性组和阴性组差异无 统计学意义(卢)0.05);但肝细胞癌患者血液XAGE一lbmRNA的阳性率明显高 于AFP*(尸<0.01),尤其对于AFP阴性肝细胞癌其检出率为82.35%,XAGE一lb ,放射免疫法测定血清AFP<20u岁L认为AFP阴性;荧光定量RT-PcR测定xAGE一lbmRNA的值为, 则认为XAGE一lbInRNA为阴性第二军医大学硕士学位报告 mRNA与AFP不具有相关性(95%可信区间为卜0.21,0.10))血液XAGE一lb mRNA在PHC患者中的表达水平高于肝炎肝硬化!良胜肝病!健康人群份丫 0.01),在肝炎肝硬化患者中的表达水平高于良性肝病和健康人群(尸<0.05), 而在良胜肝病和健康人群的表达差异无统计学意义(办0.05);ROC曲线评价 XAGE一lbmRNA!AFP!CEA!CA199对PHC的诊断价值,其AUC值分别为 0#879#0.759!0.648!0.511,XAGE一lbmRNA具有较高的诊断准确性,其次为 AFP,而CEA和CA199诊断价值较低选取的18例PHC癌组织XAGE一lbmRNA 表达水平高于癌旁组织和血液(尸<0.01),而癌旁组织表达水平高于血液(尸< 0.01)免疫组化研究100例PHC患者XAGE一lb蛋白水平表达,在1例W期患 者中,转移癌组织的表达强度明显高于原位肿瘤,其他均未见表达 结论:XAGE一lbmRNA的表达与PHc患者性别!年龄!肿瘤大小!病理类 型!临床分期!AFP无关,且对良陛肝病!肝炎肝硬化!健康人群具有鉴别意义 XAGE一lbmRNA可以预测血液中肿瘤细胞的微转移并作为一种肿瘤标志物辅助 诊断PHC,尤其对AFP阴性的肝细胞癌更显示出诊断价值,对PHC预后判断及 治疗方案的选择可能有重要意义 关健词:原发性肝癌,XAGE一lb,逆转录聚合酶链反应,免疫组化XAGE一1b