ICS?65.150
B 51
DB32
江苏省地方标准
DB32/T 3802—2020
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南美白对虾肝肠胞虫巢式聚合酶链式反应(PCR)检测方法
Detection of Enterocytozoon hepatopenaei in Litopenaeus vannamei by nested PCR
2020 - 05 - 25发布
2020 - 06 - 25实施
江苏省市场监督管理局???发布
前??言
本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。
本标准由江苏省农业农村厅提出并归口。
本标准起草单位：江苏省海洋水产研究所。
本标准主要起草人：万夕和、沈辉、乔毅、史文军、王李宝、黎慧、蒋葛、成婕、范贤平。
南美白对虾肝肠胞虫巢式聚合酶链式反应(PCR)检测方法
1 范围
本标准规定了南美白对虾（Litopenaeus vannamei）肝肠胞虫（Enterocytozoon hepatopenaei，EHP）巢式聚合酶链式反应（polymerasw chain reation，PCR）检测方法的原理、试剂材料、仪器设备、操作步骤和结果判定。
本标准适用于南美白对虾样品中肝肠孢虫带虫情况的高灵敏定性检测。
其他环境生物和饵料生物，以及非生物样品中肝肠胞虫带虫情况检测可参照此方法。
2 规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB/T 25878—2010 对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）检测 PCR法
SC/T 7202.2—2007 斑节对虾杆状病毒诊断规程 第2部分：PCR检测法
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
肝肠胞虫 Enterocytozoon hepatopenaei
一种感染对虾肝胰腺、肠道等器官的微孢子虫，可致南美白对虾生长缓慢，养殖产量严重下降。
4　技术原理
南美白对虾肝肠胞虫巢式聚合酶链式反应（PCR)检测方法是以样品DNA为模板，针对其胞壁蛋白基因设计两对特异性巢式寡核苷酸序列为引物，在四种脱氧核糖苷三磷酸存在下，利用DNA聚合酶的合成作用，经过先后两步数十次变性、退火和延伸的反应循环，使模板上介于两对引