文本描述
中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准犛犖／犜２４４０ —２０１０进 出 口 蜂 王 浆 中 咖 啡 因 含 量 的 测 定 方 法液 相 色 谱串 联 质 谱 法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀 狅犳犮犪犳犳犲犻狀犲犻狀狉狅狔犪犾犼犲犾犾狔犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱 犲狓狆狅狉狋—犔犆犕犛／犕犛２０１００１１０ 发 布２０１００７１６ 实 施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 犛犖／犜２４４０ —２０１０前 言 本 标 准 的 附 录 Ａ 、附 录Ｂ 均 为 资 料 性 附 录。本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国湖 南 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中华 人 民 共 和 国 湖 北出 入 境 检 验 检 疫局 、中 华 人 民 共 和 国 浙 江 出 入 境 检 验 检 疫局。本 标 准 主 要 起 草 人 ：王 美 玲 、王 鹏 、魏颖 、陈 笑 梅 、戴 华。本 标 准 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标准。Ⅰ 犛犖／犜２４４０ —２０１０进 出 口 蜂 王 浆 中 咖 啡 因 含 量 的 测 定 方 法液 相 色 谱串联 质 谱 法１ 范 围本 方 法 规 定 了 蜂 王 浆 中 咖 啡 因 含 量 液 相 色 谱串联 质 谱 法 的测 定 方 法。本 方 法 适 用 进 出 口 蜂 王 浆 中 咖 啡 因 含 量 测 定的 制 样 和 测 定 方 法。２ 方 法 提 要试 样 中 的 咖 啡 因 用 水 提 取 ，沉 淀 蛋 白 质后 ，经 Ｃ １８ 固 相 萃 取 小 柱 净 化 ，液 相 色 谱质谱／质 谱 法 测 定，外 标 法 定 量。３ 试 剂 和 材 料除 另 有 规 定 外 ，所 有 试 剂 均 为 分 析 纯 ，水为 二 次 蒸 馏 水。３．１ 乙 腈 ：高 效 液 相 色 谱 级。３．２ 甲 醇 ：高 效 液 相 色 谱 级。３．３ 甲 酸 ：优 级 纯。３．４ 乙 酸 铅。３．５ 草 酸 钾。３．６ 磷 酸 氢 二 钠。３．７ ２０％ 乙 酸 铅 溶液 ：取 ２０ ｇ 乙 酸 铅 ，溶 解 水 中 并 定 容 至 １００ ｍＬ。３．８ 草 酸 钾磷酸 氢 二 钠 溶 液 ：取 草 酸 钾 ３ ｇ，磷酸 氢 二 钠 ７ ｇ，加 入 １００ｍＬ３．９ ２０％ 甲 醇 水 溶液 ：取 ２０ ｍＬ 甲 醇用 水 定 容 到 １００ ｍＬ。３．１０ ６０ ％ 甲醇 水 溶 液 ：取 ６０ ｍＬ甲 醇 用 水 定 容 到 １００ ｍＬ。３．１１ ０．１％ 甲 酸 溶 液 ：准 确 取 １ ｍＬ甲 酸 用 水 定 容 到 １ ０００ ｍＬ。水 溶 解。３．１２ 咖 啡 因 （ｃａｆｆｅｉｎｅ，Ｃ８ Ｈ １０ Ｎ ４Ｏ ２，ＣＡＳ编号 ５７４３１２４ ，相 对 分子 质 量 １９４ ．１９ ）：纯 度 大于 等 于９９ ．８％。３．１３ 标 准 储 备 溶 液 ：准确 称 取 适 量 咖 啡 因 标 准 品 ，用 水 溶 解 配 成 １００ μｇ／ｍＬ 的 标 准 溶 液 ，４ ℃ 避 光 保存 ，本 标 准 溶 液 在 半 年 内 稳 定。３．１４ 标 准工 作 溶 液 ：临 用 时 用 ６０ ％甲 醇 水 溶 液 将 标准 储 备 溶 液 稀 释 成 含 咖啡 因５ μｇ／Ｌ 、１０ μｇ／Ｌ、５０ μｇ／Ｌ 、１００ μｇ／Ｌ 、５００ μｇ／Ｌ３．１５ 固 相 萃 取 柱：１８ 固 相 萃 取 小 柱 （２５０ ｍｇ，３ｍＬ ）或 相 当 者 。 使 用 前 用 ５ｍＬ 甲 醇 和 ５ ｍＬ３．１６ ０．４５μｍ滤 膜 ，有 机 系。的 标 准 工 作 溶 液。水 预 洗。Ｃ４ 仪 器 和 设 备４．１ 高 效 液 相 色 谱四极 杆 串 联 质 谱 联 用 仪 ：配电 喷 雾 （ＥＳＩ）离 子 源 。４．２ 离 心 机 ：４ ０００ ｒ／ｍｉｎ 。４．３ 涡 旋 混 匀 器 ：２００ ｒ／ｍｉｎ ～２４０００ ｒ／ｍｉｎ 可 调。４．４ 超 声 波 清 洗 器。４．５ 天 平 ，感 量 为 ０．００１ｇ、０．０００１ ｇ。１ 犛犖／犜２４４０ —２０１０５ 试 样 制 备 和 保 存取 代 表 性 样 品 约 ５００ ｇ，将其 用 力 搅 拌 均 匀 ，装 入 洁 净 容器 内 ，密 封 ，并 标 明 标 记 ，于－ １８ ℃ 以 下 保存 。 在 制 样 过 程 中 ，应 防 止 样 品 受 到 污 染 或 发生 所 测 物 质 量 的 变 化。６ 测 定 步 骤６．１ 提 取 和 净 化准 确 １ ｇ（准 确 到 ０．００１ｇ）混 合均 匀 的 样 品 于 ５０ ｍＬ离 心 管 中 ，加 入 ２０ ｍＬ水 ，于 超 声 波 清 洗 器 上超 声 １５ ｍｉｎ ，冷 却 后 加 入 ２．５ｍＬ 乙 酸 铅 溶 液 ，２．５ｍＬ草 酸 钾磷酸 氢 二 钠 溶 液 ，涡 旋 混 匀 器 上 混 匀 ，于４ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离 心 ５ ｍｉｎ 后 ，取 上 清 液 过 Ｃ １８ 固 相 萃 取 柱 ，以 １ 滴／ｓ洗 脱 速 度 ，用 ５ ｍＬ 水 、５ ｍＬ ２０ ％ 甲 醇水 淋 洗 后 ，负 压 抽 干 ，用 ２．０ｍＬ ６０ ％ 甲 醇 水 溶 液 洗 脱 并 收 集 并定 容 至 ２．０ ｍＬ，混 匀 后 ，过 ０．４５μｍ滤膜 ，供 液 相 色 谱质谱／质谱 法 测 定。６．２ 测 定６．２．１ 液 相 色 谱四 极 杆 串 联 质 谱 条 件ａ） 色谱 柱 ：
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