文本描述
犌犅15193.20—2014 犜犓 20141224 20150501 犌犅15193.20—2014 GB15193.20—2003《TK , 》。 GB15193.20—2003 “ : ——— ——— ——— ——— ——— ——— ——— ——— ——— ——— ——— ——— ——— ——— ”; TK ; ; ; ; ; THMG THG CHAT CHT ; ; ; ; ; ; ; 。 Ⅰ 犌犅15193.20—2014 犜犓 1 (thymidinekinase,TK) 。 。 2 2.1 犜犓 。 ; TK 17 ( ) ( ) 。TK 。 11 2.2 , ( 10-6 )。 3 。 TK TK , TK ( ) TdR ()。 TMP , (), dUMP TMP TMP。 ( , dUMP trifluorothymidineTFT, ),TFT ,。 TK , DNA, , ,TFT , DNA, , 。 , TFT TFT , 。 TK , / (L5178Y ) / (TK6 ), ,/ , / , 。 4 4.1 、 ( ) -80℃ 、 、 、 、。 1 犌犅15193.20—2014 4.2 4.2.1 , ( )20% (96 ) ( RPMI1640 、 10% 100IU/mL 100μg/mL)。 4.2.2 犜犎犕犌 犜犎犌 : / (thymidineT+5gmL (methotrexateM+7.5gmLglycineG ,) /( ,)。 μ ,) / μ (hypoxanthine,H) THMG 3gmL +0.1μg/mL μ : / THG 3gmL μ ()/ T+5gmL μ () /()。 H+7.5gmLG μ 。 , 1 THMG THG : 100 1 犜、犎、犕、犌 /mg /( / ) mgmL T H M G 242.2 30 10mLH2O 3 5 / 1mL1molLHCl 136.1 454.5 75.07 5 5 50mLH2O 10mLH2O 0.1 7.5 75 , T、H、M、G 5mL(20mL) 50mL, 100THMGTHG 。 4 1000 T、H、G 5mL(15mL), , ,-20℃ 。 。 1% 4.2.3 犆犎犃犜 犆犎犜 CHAT :1×10-5molL/ (hypoxnathineH,)+1×10-7molL/ CHT :1×10-5molL/ (cytosinedeoxyribosideC,)+2×10-4molL/ (aminopterinA,)+1.75×10-5molLthymidineT /(,)。 (C)+2×10-4molL/ (H)+1.75×10-5molL/ ()。 T 。 , 2 CHAT CHT : 100 2 犆、犎、犃、犜 /mg 113.6 /( /) molL C H A T 227.2 136.1 440.4 242.2 50mLH2O 1×10 -2 / 50mL1molLHCl 2×10-1 1361.0 2.2 50mLH2O 1×10 -4 423.85 10mLH2O 1.75×10 -2 , C、H、A、T 5mL(20mL)C、H、T 50mL, 100CHAT CHT 。 4 5mL(15mL), 1000 2 犌犅15193.20—2014 , ,-20℃ 。 。 1% 4.3 4.3.1 犛9 4.3.1.1 1.9g 6.15g 100mL。 4.3.1.2 0.2犿狅犾/犔 () 狆犎7.4 ( ,/) , NaHPO28.4gL440mL 4 (NaH2PO4 HO27.6gL60mL pH ·,/), 2 2 7.40.,103MPa20min 4.3.1.3 Ⅱ( ) 。 Ⅱ, /。 0.025molL 。 4.3.1.4 6 6 , /, 0.05molL 。 。 4.3.2 犛9 , 150g~200g,5~6 。 SD Wistar , , 80mgkg/ β , , β , 12h。 3d16h , ( /) 0.15molL , 。 ( ) (/) , 0.1molL3mL 4000r/min,1min~2min) 。 , , ( ( 20000r/min1min,) 。 (0℃~4℃) , 2mL 9000犵10min, , S9 , 。 -80℃ , , (Lowry), , S9 40mg 1。 , -80℃ 4.3.3 10%犛9 , , 。10%S9 S9 10mL 1∶910% S9 : 6.0mL 0.4mL 6 1.0mL Ⅱ S9 , 1.6mL 1.0mL 。 1%~10%, , , S9 , 。 3