文本描述
犌犅15193.12—2014 犎犌犘犚犜 20141224 20150501 犌犅15193.12—2014 GB15193.12—2003《 GB15193.12—2003 “ ; ; (V79/HGPRT) : 》。 ”; , ——— ——— ——— ——— ——— ——— HGPRT ; ; 。 Ⅰ 犌犅15193.12—2014 犎犌犘犚犜 1 (HGPRT) 。 。 2 2.1 犎犌犘犚犜 。 ,HGPRT X , Xq26.1; 。 X 2.2 , ( ) ( ) 。 3 , HGPRT,6 ( 6thioguanine6TG 5′(NMP),NMPDNA ,) ,HGPRT , 。 () HGPRT, , X HGPRT , 。 6TG 6TG , , , , 。 , 6TG 。 4 4.1 ( ) V79 ( )。 (), CHO ( ) L5178Y 。 TK6 4.2 。 , V79 CHO (,)、 MEMEagle Eagle , ( ) DMEM10% , 。 )20% (96 TK6 ) ( L5178Y RPMI1640 (、 )。 10% 1 犌犅15193.12—2014 4.3 /犈犇犜犃 、PBS 1∶1。-20℃ , 0.05%,EDTA 0.02%, EDTA 。 4.4 。S9 : S9 , 150g~200g 200gL/,500mgkg/ , 5 ~6。 SD Wistar , (Aroclor1254) , , 5d 12h。 , β β , / , , 80mgkg3d16h , 。 。 ( /) 0.15molL , 。 ( ) (/) , 0.1molL3mL 4000r/min,1min~2min) 。 , , ( ( 20000r/min,1min) 。 (0℃~4℃) , 2mL 9000犵10min, , S9 , 。 -80℃ , , (Lowry), , S9 S9 40mg 1。 () , 1%~10%()。 4.5 (), 6TG 5μg/mL~15μg/mL, () 。 0.5% 6 (/) 犜犎犕犌犜犎犌 4.6 , , 24h, THMG THMG , THG( ) 1d~3d 。 ( ): THMG ———,5×10-6molL/; ——— ,5×10-5molL/; ,4×10-7molL/; ——— ——— ,1×10-4molL/。 5 5.1 5.1.1 , 。 。 , 。 2 犌犅15193.12—2014 5.1.2 , , 。 S9 ; , (), DMSO 0.5%。 5.1.3 , ( ) 。 5.1.3.1 , (3methylcholanthrene)、犖 12dimethylbenz[犪]anthracene ) 。 、 , 3 [](, (犖nitrosodimethylamine)、,712 , 犪7 (ethyl methanesulphonate)、 (ethylnitrosourea )。 。 5.1.3.2 ( ) , 。, , 。 5.2 5.2.1 、 。 pH 5.2.2 , , 5.2.3 4 。 。 。 , , ; , 2~槡10 10%~20%( 10%)。 , 5μL/mL、5mg/mL 0.01molL/。 ; , , , S9 ; , 。 5.3 5.3.1 5.3.1.1 5×10 5 100mm , 、 37℃5% 24h。 5.3.1.2 , PBS , 、 ( S9 3