ICS07.100.30 DB34 C 53 安徽省地方标准 DB 34/T 1374—2011 生鲜乳中三聚氰胺的测定 —酶联免疫吸附法 Determination of Melamine in Raw Milk Enzyme Linked immunosorbent assay 2011-03-16发布 2011-04-16实施 安徽省质量技术监督局发 布   DB34/T 1374—2011 前言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省畜牧兽医局提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：安徽省兽药饲料监察所(安徽省畜产品质量安全检测中心)。 本标准主要起草人：许世富、丁作坤、汤春莲、陶小平、吴昊、陈文帮、李珲。 I   DB34/T 1374—2011 生鲜乳中三聚氰胺的测定—酶联免疫吸附法 1范围 本标准规定了生鲜乳中三聚氰胺检测的酶联免疫吸附测定方法。 本标准适用于生鲜乳中三聚氰胺的常规快速测定，阳性样品需用气相色谱－质谱法（GC/MS）或液 相色谱质谱法（LC/MS-MS）确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 3试样制备 采集的生鲜乳应密闭保存于-18℃ 的冰柜中，用前恢复至室温，摇匀，备用。 4原理 本方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：样品中游离的三聚氰胺与酶标板上固定的 三聚氰胺抗原竞争特异性抗体，通过酶标Ⅱ抗的反应，洗掉游离的酶标物，再通过酶的专一性显色剂显 色，根据显色的深浅来判断样品中三聚氰胺的含量。根据竞争性原理，样品中游离的三聚氰胺少，则酶 标Ⅱ抗结合多，显色就深，相反，则显色浅。结果可以通过在 450nm 处测定吸收值计算，颜色变化的 程度反映样品中三聚氰胺的含量，在一定浓度范围内吸光度的高低与样品中三聚氰胺的含量成反比。 5试剂和材料 5.1除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的二级水。 5.2竞争酶标免疫法三聚氰胺试剂盒，2℃～8℃ 冰箱中保存。 5.2.1微孔板：包被有三聚氰胺抗原。 5.2.2三聚氰胺标准溶液：0 ng/mL、10 ng/mL、30 ng/mL、90 ng/mL、270 ng/mL、810 ng/mL。 5.2.3三聚氰胺酶标Ⅱ抗工作液。 5.2.4三聚氰胺抗体工作液。 5.2.5浓缩样本稀释液。 5.2.6浓缩洗涤液。 5.2.7底物A液。 5.2.8底物B液。 5.2.9终止液。 1