1.2 原理:
用高效的微生物脂蛋白脂肪酶(LPL)使血清中TG水解成甘油与脂肪酸,将生成的甘油用甘油激酶(GK)及三磷酸腺苷(ATP)磷酸化,以磷酸甘油氧化酶(GPO)氧化3-磷酸甘油(G-3-P),然后以过氧化物酶(POD)、4-氨基比林(4-AAP)与4-氯酚(三者合称PAP)显色,测定所生成的H2O2,故本法简称为GPO-PAP法,反应式如下:
TG + 3H2O脂肪酶 甘油 + 3 RCOOH(脂肪酸)
甘油 + ATP甘油激酶甘油-3-磷酸(G-3-P) + ADP
G-3-P + O2 GPO 磷酸二羟丙酮(DAP) + H2O2
2H2O2 + 4-AAP + 4-氯酚过氧化物酶 苯醌亚胺非那腙 + 4H2O + HCl
1.3标本的采集
1.3.1受检者的准备:
除胆固醇(TC)测定不一定用空腹血外,测定甘油三酯(TG)、脂蛋白与载脂蛋白(apo)时应在禁食(可少量饮水)12小时后抽血。24小时内不饮酒,以免影响TG水平。对于体检对象抽血前应有2周左右时间保持平常的饮食习惯,近期内体重稳定,无急性病、外伤、手术等意外情况。妊娠后期各项血脂都会增高,应在产后或终止哺乳吼个月查血才能反映基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物,如降血脂药、避孕药、噻嗪类利尿剂、β-受体阻滞剂、免疫抑制剂、某些降压药、降糖药、胰岛素及其他激素制剂等,在查血以前应根据所用药物的特性停止用药数天或数周,否则应记录用有关药物的情况。对体检对象及作前瞻性观察者,还应注意采血的季节,因为血脂水平有季节性变动,为了前后比较应在每年同一季节检查。
1.3.2静脉采血:除非是卧床的病人,一般在采血时取座位。体位影响水分在血管内的外的分布,因此影响血脂水平。例如站立5分钟可使血脂浓度提高5%,15分钟可提高16%,故在抽血前至少应静坐5分钟。
一般用肘静脉取血,也可以用其他臂静脉。止血带的使用不可超过1分钟,穿刺成功后应立即松开止血带,然后抽血。静脉阻滞5分钟可TC增高10%~15%。
1.3.3抗凝剂:血清和血浆均可用于TG测定,但后者结果比前者约低3%。我国多用血清标本,如用血浆测定应乘以校准系数1.03,或在报告单上注明。如用血浆,多主张用EDTA-Na2抗凝(1mg/ml)。EDTA抗凝血浆中的TC和TG水平比血清中约低3%,EDTA浓度越高血浆中偏低越明显。但肝素抗凝不影响血浆中水平。
1.3.4标本处理:血标本应尽快送往化验室,室温放置30~40分钟后离心,放置时间不得超过3小时。血清必须吸出,转移至有盖小试管中(或用封口膜防止水分挥发),如不能当天测定,可暂存4℃冰箱中,至少可稳定4天。如需长期保存,用作TC测定者-20℃已足够,用作TG、脂蛋白、apo测定者最好保存在-70℃,不要反复冰冻与融化。
1.3.5标本稳定性:血清。2~8℃稳定3天,-20℃稳定数周,避免反复冻融。
1.3.6标本容器:普通真空采血管
1.4 试剂
1.4.1 试剂均购自北京九强生物技术有限公司
1.4.2试剂组成与浓度:
试剂成分
浓度
Good`缓冲液,pH7.2
4氯-苯酚
Mg2+
ATP
甘油三酯激酶
过氧化物酶
脂蛋白酯酶
4-氨基-安替吡啉
甘油-3-磷酸氧化酶
50mmol/L
4mmol/L
15mmol/L
2mmol/L
≥0.4KU/L
≥2KU/L
≥2KU/L
0.5mmol/l
≥0.5KU/L
1.4.3试剂稳定性
1.4.3.1试剂在2-8℃密封避光保存可稳定至有效期,有效期为12个月。