ICS 11.020
CCS C 61
WS
中华人民共和国卫生行业标准
WS/T 792—2021
日本血吸虫抗体检测标准 酶联免疫吸附
试验法
Detection standard of antibody against Schistosoma japonicum—Enzyme-linked
immunosorbent assay
2021—11—23 发布 2022—05—01 实施
中华人民共和国国家卫生健康委员会 发 布 WS/T 792—2021
前言
本标准由国家卫生健康标准委员会寄生虫病标准专业委员会负责技术审查和技术咨询，由中国疾病
预防控制中心负责协调性和格式审查，由国家卫生健康委疾病预防控制局负责业务管理、法规司负责统
筹管理。
本标准起草单位：杭州医学院（浙江省医学科学院）、中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、
安徽省血吸虫病防治研究所、宁波市疾病预防控制中心、江西省寄生虫病防治研究所。
本标准主要起草人：闻礼永、严晓岚、熊彦红、郑彬、张剑锋、汪天平、俞丽玲、许国章、林丹丹、
周晓农。
I WS/T 792—2021
日本血吸虫抗体检测标准酶联免疫吸附试验法
1 范围
本标准规定了检测日本血吸虫抗体的酶联免疫吸附试验方法。
本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对人体血清中日本血吸虫抗体的检测。
2 规范性引用文件
本标准没有规范性引用文件。
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1
酶联免疫吸附试验 enzyme-linked immunosorbent assay；ELISA
利用抗原抗体之间专一性键结之特性，对检体进行检测；由于结合于固体承载物上之抗原或抗体仍
可具有免疫活性，因此设计其键结机制后，配合酵素呈色反应，即可显示特定抗原或抗体是否存在，并
可利用呈色之深浅进行定量分析的试验。
3.2
可溶性虫卵抗原 soluble egg antigen
血吸虫虫卵经匀浆和超声破碎等处理后离心收集的上清液，含蛋白质、糖蛋白、多糖等多种成分复
合物。
3.3
金黄色葡萄球菌蛋白A staphylococal protein A
从金黄色葡萄球菌细胞壁分离的蛋白质，能与人及多种哺乳动物血清中IgG分子的Fc片段结合，作
为第二抗体。
4 仪器设备
4.1 台式低速离心机
最高转速大于或等于2 500 r/min，或最大相对离心力大于或等于800 g。
4.2 酶标专用比色计
带有450 nm、492 nm和630 nm滤光片，分辨率0.001光密度（optical density，OD）值。
4.3 恒温水浴箱
2 WS/T 792—2021
控温范围 5 ℃～99.9 ℃，温度分辨率/波动度0.1 ℃/±0.5 ℃。
4.4 微量移液器
量程范围1 μL～10 μL，增量0.1 μL；量程范围10 μL～100 μL，增量1 μL；量程范围100 μL～1 000 μL，
增量5 μL。
5 试剂或材料
5.1 酶标反应板
96孔或40孔微量聚苯乙烯或聚氯乙烯塑料凹孔反应板。
5.2 包被抗原
可溶性虫卵抗原，制备方法见附录A中A.1。
5.3 包被缓冲液
0.05 mol/L pH9.6 碳酸盐缓冲液，制备方法见附录A.2。
5.4 样品洗涤液
含0.05% 吐温-20 的 0.01 mol/L pH7.4 磷酸盐缓冲液（PBS-T），制备方法见附录A.3。
5.5 封闭液
2% 牛血清白蛋白（BSA），制备方法见附录A.4。
5.6 阳性对照血清
感染日本血吸虫的兔混合血清，制备方法见附录A.5。
5.7 阴性对照血清
健康兔混合血清，制备方法见附录A.6。
5.8 样品稀释液
含0.1% BSA的PBS-T，制备方法见附录A.7。
5.9 酶标记物
金黄色葡萄球菌蛋白A标记辣根过氧化物酶，制备方法见附录A.8。
5.10 底物缓冲液
pH 5.0 磷酸-柠檬酸缓冲液，制备方法见附录A.9。
5.11 底物使用液
3,3’，5,5’-四甲基联苯胺（TMB）或邻苯二胺（OPD），制备方法见附录A.10。
5.12 终止液
2 mol/L 硫酸，制备方法见附录A.11。
3 WS/T 792—2021
6 检测步骤 示意图和注意事项见附录B。
6.1 样本准备
采集末梢血100μL或静脉血2 mL，室温下放置至血块收缩后，800 g 离心5 min，分离出血清进行
检测。
6.2 样本检测
6.2.1 抗原包被
于酶标反应板凹孔中，加入100 μL 以包被缓冲液1:1000～1:3000 稀释的可溶性虫卵抗原，置4 ℃
冰箱过夜。次日，倾去抗原，用样品洗涤液洗涤 3 次，每次 3 min～5 min，甩干。为减少非特异性反应，
小孔中可再加100 μL 封闭液过夜，甩干。4 ℃保存备用。
6.2.2 加受检和对照血清
用样品稀释液1:100 比例稀释受检者、阴性对照和阳性对照血清，各取 100 μL 稀释血清加入酶标
反应板的小孔中，每板同时设置两孔阴性对照血清、一孔阳性对照血清和一孔样品稀释液空白对照，置
恒温水浴箱内37 ℃孵育 1 h。如 6.2.1 洗涤甩干。
6.2.3 加酶标记物
用样品缓冲液1:1 000～1:4 000 比例稀释酶标记物，取 100 μL 加入酶标反应板的小孔中，置恒温水
浴箱内 37 ℃孵育 1 h。如 6.2.1 洗涤甩干。
6.2.4 加底物
每孔加入新配置的底物使用液100 μL，置恒温水浴箱内 37 ℃反应 30 min。
6.2.5 终止反应
每孔加入 50 μL 终止液终止反应。
6.2.6 结果判定
以空白对照调零，读取酶标专用比色计上各孔 450 nm（TMB 为底物）或492 nm（OPD 为底物）
波长的 OD 值，以 630 nm 作为参比波长。
以受检样本孔OD 值/阴性对照孔OD 值（P/N）≥2.1 倍判为阳性。当阴性对照OD 值低于 0.05 时，
按 0.05 计算。
4