ICS 65.020.30 B 43 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5145—2019 鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚 胺残留检测方法 酶联免疫吸附法 2019 - 12 - 27发布 2020 - 01 - 28实施 河北省市场监督管理局 发布 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由河北省农业农村厅提出。 本标准起草单位：河北省兽药监察所、河北英茂生物科技有限公司、北京维德维康生物技术有限 公司、秦皇岛市农产品质量安全监督检验中心、承德市畜禽水产品质量检验监测中心、石家庄市畜产 品质量监测中心、唐山市食品药品综合检验检测中心、邢台市动物卫生监督所、邢台市农业农村局、 邢台市畜牧站。 本标准主要起草人：王萍、刘怡菲、翟明成、李研东、闫超、李海龙、马立才、张嘉楠、刘力、 李云、崔沙沙、赵芳、武侠均、钱春彩、左佳、 孟令庄、李文香、李肖莉、陈宝明。 鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留检测方法 酶联 免疫吸附法 1 范围 本标准规定了鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留量酶联免疫吸附（ELISA）法的制 样和检测方法。 本标准适用于鸡肉、鸭肉中金刚烷胺、金刚乙胺、索金刚胺残留量的快速筛选测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注的日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 制样 3.1 样品的制备 取新鲜或冷冻的空白或供试组织，去除脂肪和筋膜，绞碎均质。 3.2 样品的保存 -20 ℃以下贮存，保存期6个月。 4 测定方法 4.1 原理 本方法的测定原理是竞争性酶联免疫反应。酶标板微孔上预包被有偶联抗原，加标准品或待测样 品后，再加抗金刚烷胺抗体，包被抗原与加入的标准品或待测样品竞争抗体，通过洗涤除去游离的抗 原、抗体及抗原抗体结合物。再加入酶标记物，酶标记物与抗体结合。加入底物液后，结合到板上的 酶标记物使底物显色。加终止液，用酶标仪测量微孔溶液的吸光度值，金刚烷胺浓度与吸光度值成负 相关，按绘制的校正曲线定量计算。 4.2 试剂和材料 以下所用试剂，除特殊注明外均为分析纯，水为符合 GB/T 6682规定的二级水。 a) 乙腈； b) 正己烷； c) 金刚烷胺类药物试剂盒，组成见附录B； d) 样品稀释工作液：用水将浓缩样品稀释液（附录B.7）按1：19体积比进行稀释，混匀后备 用； e) 洗涤工作液：用水将浓缩洗涤液（附录B.8）按1：19体积比进行稀释，混匀后备用。 4.3 仪器和设备 a) 分析天平：感量0.01 g； b) 旋涡振荡器； c) 离心机：转速4000 rpm以上； d) 氮气吹干仪； e) 酶标仪（配备450 nm、630 nm滤光片）； f) 单道微量移液器：20μL～200 μL，100μL～1000 μL 和1 mL～5 mL； g) 多通道微量移液器：50μL～300 μL； h) 恒温箱； i) 计时器：精确到秒； j) 离心管：15 mL 、50 mL。 4.4 测定步骤 4.4.1 试料的制备 试料的制备包括： ——取制备后的供试样品，作为供试试料； ——取制备后的空白样品，作为空白试料； ——取制备后的空白样品，添加适宜浓度的标准溶液作为空白添加试料。 4.4.2 试样提取、净化 准确称取试样3 g±0.05 g于50 mL离心管中，加入50 μL样品提取剂、6.0 mL乙腈，充分涡动2 min； 室温（25 ℃±5 ℃）下4000 rpm离心5 min；取3.0 mL上清液于15 mL干净离心管中；60 ℃～70 ℃水浴 氮气吹干；加入2 mL正己烷充分涡动30 s，再加入1.0 mL样品稀释液，充分涡动30 s；4000 rpm离心5 min；弃去上层正己烷及中间层杂质；取50 μL进行检测。 4.4.3 试样测定 4.4.3.1 测定条件 所有操作应在25℃±5℃条件下进行，金刚烷胺检测试剂盒中所有试剂的温度均应回升至