中华人民共和国国家标准GB5009.158—2016食品安全国家标准食品中维生素K1的测定2016-12-23发布2017-06-23实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布GB5009.158—2016前言本标准代替 /—《蔬菜中维生素K1的测定》和GB5413.10—2010《食品安全国GBT5009.158 2003家标准婴幼儿食品和乳品中维生素 K1的测定》GBT5009.158—2003相比,主要变化如下 :本标准与 /———标准名称修改为 “食品安全国家标准 食品中维生素 K1的测定”;———增加了高效液相色谱-荧光检测法;———增加了液相色谱-串联质谱法;———删除了高效液相色谱-紫外检测法ⅠGB5009.158—2016食品安全国家标准食品中维生素K1的测定范围1本标准规定了食品中维生素 K1的测定方法本标准第一法为高效液相色谱 -荧光检测法,第二法为液相色谱-串联质谱法,均适用于各类配方食品植物油水果和蔬菜中维生素 K1的测定第一法高效液相色谱 -荧光检测法原理2婴幼儿食品和乳品 植物油等样品经脂肪酶和淀粉酶酶解,正己烷提取样品中的维生素K1后,用液相色谱柱将维生素 K1与其他杂质分离 ,锌柱柱后还原 ,荧光检测器检测 ,外标法定量水果蔬菜等低脂性植物样品 ,用异丙醇和正己烷提取其中的维生素K1,经中性氧化铝柱净化,去C18除叶绿素等干扰物质 用C18液相色谱柱将维生素K1与其他杂质分离 ,锌柱柱后还原 ,荧光检测器检测,外标法定量试剂和材料3除非另有说明 ,本方法所用试剂均为分析纯 ,水为GBT6682/ 规定的一级水试剂3.1无水乙醇()CHCHOH3 23.1.13.1.23.1.33.1.43.1.53.1.63.1.73.1.83.1.93.1.103.1.113.1.12碳酸钾( )KCO23无水硫酸钠()NaSO24异丙醇( )CHO3 8正己烷( )CH6 14甲醇():色谱纯CHOH3四氢呋喃( ):色谱纯CHO4 8乙酸乙酯(CHO)4 82冰乙酸():色谱纯CHCOOH3氯化锌(ZnCl2):色谱纯无水乙酸钠()CHCOONa3氢氧化钾(KOH)3.1.13脂肪酶:酶活力≥700U/mg3.1.14淀粉酶:酶活力≥1.5U/mg3.1.15锌粉:粒径50μm~70μm1GB5009.158—2016试剂配制3.23.2.1 40%氢氧化钾溶液:称取20g氢氧化钾于100mL烧杯中,用20mL水溶解,冷却后, 加水至50mL,储存于聚乙烯瓶中 3.2.2磷酸盐缓冲液(pH8.0):溶解54.0g磷酸二氢钾于300mL水中,用40%氢氧化钾溶液调节至8.0,加水至500mLpH正己烷-乙酸乙酯混合液 (90+10):量取90mL正己烷,加入10mL乙酸乙酯,混匀3.2.33.2.4流动相:量取甲醇900mL,四氢呋喃100mL,冰乙酸0.3mL,混匀后,加入氯化锌1.5g,无水乙酸钠0.5g,超声溶解后,用0.22μm有机系滤膜过滤标准品3.3K CH O CAS号:84-80-0):纯度≥99%,或经国家认证并授予标准物质证书的标准维生素(,131 462物质标准溶液配制3.43.4.1维生素K1标准贮备溶液(/ ):准确称取1mgmL50mg(精确至0.1mg)维生素K1标准品于50mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度将溶液转移至棕色玻璃容器中 ,在-20℃下避光保存,保存期2个月标准储备液在使用前需要进行浓度校正,校正方法参照附录 A维生素K1标准中间液(/ ):准确吸取标准贮备溶液100gmL10.00mL于100mL容量瓶中,加3.4.2甲醇至刻度,摇匀将溶液转移至棕色玻璃容器中,在-20℃下避光保存,保存期2个月维生素K1标准使用液(/ ):准确吸取标准中间液1.00mL于100mL容量瓶中,加甲μ3.4.31.00gmLμ醇至刻度,摇匀3.4.4标准系列工作溶液:分别准确吸取维生素 K1标准使用液0.10mL0.20mL0.50mL1.00mL2.00mL4.00mL于10mL容量瓶