ICS DB51 四川省地方标准 DB 51/ XXXXX—2013 水稻纹枯病菌对井冈霉素抗药性 室内测定技术规程 （报批稿） 四川省质量技术监督局发 布   DB51/ XXXXX—2013 目次 前言................................................................................II 1范围 .............................................................................. 1 2仪器及用具 ........................................................................ 1 3试剂和材料 ........................................................................ 1 4方法 .............................................................................. 1 5数据统计及分析 .................................................................... 2 6结果判定 .......................................................................... 2 附录A（资料性附录）试验药剂计算方法................................................4 附录B（资料性附录）水稻纹枯病田间症状描述..........................................5 I  DB51/ XXXXX—2013 前言 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：四川省农业科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人：李洪浩、吴婕、向运佳、彭化贤、刘波微、席亚东、温静、王晓黎、黄晶。 II  DB51/ XXXXX—2013 水稻纹枯病菌对井冈霉素抗药性 室内测定技术规程 1范围 本标准规定了水稻纹枯病菌对井冈霉素抗药性室内测定技术。 本标准适用于四川省水稻纹枯病菌室内对井冈霉素的抗药性评价。 2仪器及用具 冰箱、超净工作台、称量纸、打孔器（直径5mm）、电炉、电子天平、高压消毒锅、酒精灯、接菌 针、刻度试管、滤纸、镊子、培养皿、容量瓶、烧杯、生化恒温箱、锥形瓶、手术刀或剪刀、吸管、移 液器。 3试剂和材料 除非另有说明，在本标准中仅使用确认的分析纯试剂和无菌蒸馏水。 马铃薯、葡萄糖、琼脂、井冈霉素原药A和70%酒精。 4.1含药培养基的制作 取适量井冈霉素原药A，用无菌蒸馏水溶解配制成母液，再分别用无菌蒸馏水稀释成系列浓度的药 液。在无菌操作条件下，根据试验处理将预先融化的灭菌PDA培养基定量加入无菌锥形瓶中，按照药液 与培养基体积比1:9，从低浓度到高浓度依次定量吸取药液，分别加入上述锥形瓶中，充分摇匀。然后 分别倒入3个培养皿中，每皿15mL，制成相应浓度的含药平板。 在水稻抽穗期采集带有典型水稻纹枯病症状的病稻秆，装入纸质袋内，记载采集地点、时间、品种 名称和采集人。水稻纹枯病田间症状描述见附录B。 水稻纹枯病菌必须是从当年采集样品中分离获得的分离物。用剪刀将水稻叶片的病健部剪成直径为 4mm~5mm的小块，放入无菌蒸馏水中清洗30s，再放入70%酒精中清洗15s，重复两次后再用无菌蒸馏水清 洗，用无菌滤纸吸去样品上的水分后，将样品转入马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上，置于恒温箱（26 ℃±1℃）内培养。24h后切取样品周围含有菌丝的培养基，置于马铃薯葡萄糖琼脂培养基平板上，置于 恒温箱（26℃±1℃）内培养备用。 1