微生物快速检测技术的发展现状 华粤行仪器有限公司 邹黎明 华粤行仪器有限公司 华粤行仪器有限公司 企业为什么需要微生物快速检测？ 市场销售环节要求快速出货。尤其是一些保质期较短的产品。 减少物流的压力，尽可能减少仓存，加快资金周转。 节约人力资源成本（外资企业尤其突出） 对于运行HACCP质量保证体系的企业来说，快速检测方法尤其重要。可以快速检测原料及半成品的污染情况，以采取相应的措施控制最终产品的微生物超标情况。 快速方法势在必行 国外许多政府检测机构都在大量使用快速检测方法，尤其是ATP法、免疫法、阻抗法和显色培养基法在国外应用相当成功。 国内的许多政府检测机构也都已经在使用或正在考虑使用国外先进的快速检测技术。 从长远发展趋势来说，快速方法是微生物检测的一大方向。 华粤行仪器有限公司 螺旋平板法 DWS螺旋平板接种仪 aColyte自动菌落计数仪 螺旋平板原理 平皿旋转 接种针往外移动 同时自动将样品 稀释1000倍 螺旋平板法的优缺点 优点： 与传统方法相比，无需稀释3个梯度，每个梯度倒2个平板，节省了大量人力物力。 缺点： 检测时间并没有缩短，菌落总数仍需要培养48小时。 需要配合自动菌落计数仪，否则人工计数更麻烦。 滤膜法 滤膜法常用于可过滤样品的微生物检测。 优点：灵敏度增大，菌落无扩散情况，便于计数。 缺点：需要额外的支出购买真空泵，多联支架及一次性滤膜；如果抽滤过程空气洁净度不够，有可能造成二次污染，尤其是对菌数要求特别严格的产品，如啤酒，澄清果汁，桶装饮用水等。 皿膜法—以纸片法为代表 纸片法是目前被广泛接受的方法。国标餐具大肠菌群采用的就是纸片法。 优点：无需制备培养基，携带方便，非漫延菌落计数较方便。 缺点：不能节省检测时间。检测成本相对偏高。大肠菌群纸片存在与MPN法无法对应的问题，金黄色葡萄球菌纸片存在取样量太低的问题。目前仅细菌总数纸片有一些用户。 常规微生物快速检测技术现状 快速检测微生物数量的新方法： 1、ATP法：目前产品较多，如CHARM，Biotrace, …..等。 2、电化学法：Sy-Lab公司Bactrac 4300，Tempo,… 3、颜色变化：如梅里埃的Bact/Alert和Foss的MicroFoss。 4、流式细胞技术及激光扫描技术 5、其它：热量法，放射测量法 华粤行仪器有限公司 表面洁净的检测方法 微生物学法：纸片、琼脂板、棉签拭子、海绵拭子 非微生物学法（快速法）：ATP(三磷酸腺苷，蛋白质, 降解糖、NADP(辅酶II)，其它。 ATP---三磷酸腺苷 ATP来源于 细菌 酵母 霉菌 生物膜 组织残留 废弃物污染 人的污染 ATP法两大用途 1、用于食品、化妆品和药品企业对生产线和管道进行快速清洁程度检测。政府检测机构用ATP方法缺乏法律依据。ATP法与微生物数量没有必然的联系。 2、改良后用于食品、化妆品的商业无菌检测或终产品检验。 LUM－T清洁程度快速检测 PocketSwab Plus < 30 秒获得结果 取样 混合 检测 LUM-T的独特优势 CHEF 熟肉制品成熟度检验 MicroQ 水中微生物污染程度检测 Cidelite 杀虫剂残留初筛 Paslite 牛奶巴氏消毒效果 Somalite 体细胞计数 SL/MRL test 抗生素残留检测（连接ROSAimager) 基于ATP原理的用于成品检测的微生物检测系统 CharmLUM-96 （用于UHT产品） Biotrace Celsis（主要用于化妆品） Millipore公司的MicroScan Celsis和LUM-96 保温2天，检测30分钟（96个样） ATP法检测成品的优缺点 优点：LUM-96通常用于进行商业无菌检测。可大大缩短库存时间，减少物流压力和成本。 缺点：ATP方法需要消耗大量的较昂贵的试剂，对仪器的清洗保养要求特别高。另外，客户通常怀疑假阴性的可能，特别是用ATP单个检测代替常规微生物和致病微生物检测，其风险是一定存在的。(如保温增菌时间不够，菌数未达到一定数量，取样量太小，由于培养基原因，目标致病菌未大量增菌等原因) Millipore公司最新推出的MicroStar MicroStar的原理及局限性 MicroStar快速微生物检测系统是结合了生物荧光、膜过滤及CCD荧光照相检测等技术的新型检测系统. 可过滤样品经膜过滤后，将菌截留在特殊的滤膜上，滤膜放置在培养基表面增菌后取出，加ATP释放剂，然后加荧光素和荧光素酶，显示的荧光信号在荧光显微镜或荧光检测器下观察并计数。 MicroStar的优缺点 优点：缩短培养时间，提高灵敏度。适合于菌数较低的可过滤产品使用。 缺点：仪器较昂贵，运行成本也非常贵。不能用于检测未知的可能菌数较高的样品(不知稀释多少倍，因菌数必须稀释至80个左右)。整个检测时间还不够快，通常需16小时以上。 电化学方法(电导率法或电阻抗法) 奥地利Sylab公司的Bactrac4300和Biotrac4200 梅里埃公司的Bactometer和Tempo 英国Multhus公司(已倒闭) 英国DWS公司的Rabit …… 外观比较 Bactrac4300 梅里埃的BactoMeter DWS公司的Rabit 马色斯120 世界上最好的电化学微生物快速检测产品Bactrac 4300系统 Sy-lab —Bactrac4300常规微生物项目快速检测技术 MicroFoss(Biosys) 微生物自动监测仪 微生物生长导致培养基 pH值发生变化，由光学 检测器检测底部琼脂层 的颜色变化，记录达到 突变点的时间。 Microfoss的特点 与阻抗法类似，可以实现快速检测。 缺点：需要购买原厂的预装培养基，应用范围受限制，成本高昂。因此在我国目前还没有用户。 梅里埃的BacT/Alert微生物检测仪 基于微生物生成产生CO2的原理。CO2积累越多，底部的CO2传感器变黄，由LED发射一束光至底部，探头检测反射光的强度。光强度与微生物数量有一定关系。 方法较新，用户还需要一个过程了解。