犐犆犛０７．０８０ 犃２１ 中华人民共和国国家标准 犌犅／犜３８０９５—２０１９ 犇犎犃、犈犘犃含量测定　气相色谱法 犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犱狅犮狅狊犪犺犲狓犪犲狀狅犻犮犪犮犻犱犪狀犱犲犻犮狅狊犪狆犲狀狋犪犲狀狅犻犮 犪犮犻犱犮狅狀狋犲狀狋—犌犪狊犮犺狉狅犿犪狋狅犵狉犪狆犺狔 ２０１９１０１８发布２０１９１０１８实施 国家市场监督管理总局 中国国家标准化管理委员会发布 前　　言 　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。 本标准由中国标准化研究院提出并归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院、中国水产科学研究院南海水产研究所、中国标准化研究院、 浙江省海洋水产研究所、北京萨姆伯科技有限公司、河北养元智汇饮品股份有限公司、中国农村技术开 发中心、华测检测认证集团北京有限公司、中国科学院过程工程研究所。 本标准主要起草人：杨贤庆、荣辉、李乐、张小军、邓建朝、马爱进、岑剑伟、李来好、马海霞、宋金龙、 郝帅、姚奎章、戴炳业、董立雅、黄永东、夏君霞、赵慧博、齐兵、崔岩。 Ⅰ 犌犅／犜３８０９５—２０１９ 犇犎犃、犈犘犃含量测定　气相色谱法 １　范围 本标准规定了用气相色谱法测定二十二碳六烯酸（ＤＨＡ）、二十碳五烯酸（ＥＰＡ）含量的方法。 本标准适用于鱼油、微藻中ＤＨＡ、ＥＰＡ 含量的测定。 本标准不适用于乙酯化的鱼油测定。 本方法检出限为１０ｍｇ／ｋｇ，定量限为３３ｍｇ／ｋｇ。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 ＧＢ／Ｔ６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　原理 试样经三氯甲烷甲醇法提取油脂，然后经甲酯化后，气相色谱毛细管柱分离，氢火焰离子化检测器 检测，内标法定量。 ４　试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 ４．１　水：ＧＢ／Ｔ６６８２，一级。 ４．２　甲醇：色谱纯。 ４．３　正己烷：色谱纯。 ４．４　犇犎犃：纯度≥９８％。 ４．５　犈犘犃：纯度≥９８％。 ４．６　十七碳烷酸：纯度≥９８％。 ４．７　０．８犿狅犾／犔氢氧化钾甲醇溶液： 称取５．２４ｇ氢氧化钾溶于１００ｍＬ 无水甲醇中，充分混匀。 ４．８　２．０犿犵／犿犔十七碳烷酸内标储备液： 称取０．０５００ｇ十七碳烷酸于２５ｍＬ 容量瓶中，加入适量正己烷使溶解，并稀释至刻度，摇匀。 ４．９　犇犎犃和犈犘犃标准工作溶液： 分别称取０．０１００ｇ的ＤＨＡ 和ＥＰＡ 标准品于５ ｍＬ 容量瓶中，加入适量正己烷使溶解，并稀释至 刻度，摇匀。然后分别取０．１ｍＬ、０．２ｍＬ、０．４ ｍＬ、０．８ ｍＬ、１．５ ｍＬ 于５个１０ ｍＬ 容量瓶中，分别移入 十七碳烷酸内标储备液２．０ｍＬ，加入正己烷使溶解，并稀释至刻度，摇匀。 ５　仪器设备 ５．１　气相色谱仪：配有氢火焰离子化检测器（ＦＩＤ）。 １ 犌犅／犜３８０９５—２０１９ ５．２　天平：感量０．０１ｇ、０．０００１ｇ。 ５．３　研磨仪。 ５．４　旋涡式振荡混合器。 ５．５　超声波破碎仪。 ５．６　真空干燥箱。 ５．７　恒温水浴锅。 ６　测定步骤 ６．１　取样 微藻：称取１０．００ｇ微藻，研碎后称取１．００ｇ均匀样品，待提取油脂所用。 鱼油：取０．１０００ｇ。 ６．２　提取 取１．００ｇ微藻干粉试样，放入５０ｍＬ 聚四氟乙烯试管中，加入６．０ｍＬ 蒸馏水，加入三氯甲烷甲醇 （１∶２，体积比）混合液２２．５ｍＬ，振荡混匀后用超声波破碎仪破碎２ ｍｉｎ，加入７．５ ｍＬ 三氯甲烷振荡混 匀３０ｓ，再加入７．５ｍＬ 蒸馏水振荡混匀３０ｓ，分液漏斗静置分层，分离油层，真空干燥，称重并计算油脂 含量。 ６．３　脂肪酸甲酯化 称取０．１０ｇ油脂样品置于１０ｍＬ 带盖离心管中，加入２ｍＬ 乙醚正己烷（２∶１，体积比）混合液，摇 匀后１５ｍｉｎ，加入０．８ｍｏｌ／Ｌ 的氢氧化钾甲醇溶液２ｍＬ，摇匀后在６０ ℃恒温水浴下反应１５ｍｉｎ，沿壁 加水到１０ｍＬ 刻度处，静置分层，将上清液全部转移至量器内，用正己烷定容至１ｍＬ，稀释一定倍数后 待进样分析。 ６．４　测定 ６．４．１　气相色谱参考条件 气相色谱参考条件如下： ａ）　色谱柱：聚二氰丙基硅氧烷毛细管柱（０．３２ｍｍ×０．２５μｍ×３０ｍ），或相当者； ｂ）　载气及流速：载气为氮气，流速为１．５ｍＬ／ｍｉｎ； ｃ）　柱温程序：初始温度１６０ ℃（保持３ｍｉｎ），以６ ℃／ｍｉｎ速率升到２３０ ℃，保持１５ｍｉｎ；