犐犆犛１１．１００ 犆６２ 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 犛犖／犜５１０８—２０１９ 国境口岸轮状病毒、星状病毒、诺如病毒、 札如病毒四联犎犚犕犃检测方法 犇犲狋犲犮狋犻狅狀狅犳狉狅狋犪狏犻狉狌狊，犪狊狋狉狅狏犻狉狌狊，狀狅狉狅狏犻狉狌狊犪狀犱狊犪狆狅狏犻狉狌狊犫狔 狇狌犪犱狉犻狆犾犲狓犎犚犕犃犪狋犳狉狅狀狋犻犲狉狆狅狉狋狊 ２０１９０９０３发布２０２００３０１实施 中华人民共和国海关总署发布 前　　言 　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国拱北海关，深圳市计量质量检测研究院。 本标准主要起草人：汪海波、莫秋华、杨泽、兰全学、杨国武、史咏梅、涂承宁、林继灿。 Ⅰ 犛犖／犜５１０８—２０１９ 国境口岸轮状病毒、星状病毒、 诺如病毒、札如病毒四联犎犚犕犃检测方法 １　范围 本标准规定了国境口岸轮状病毒、星状病毒、诺如病毒和札如病毒这四种病毒的检验对象、方法、结 果报告、生物安全要求及阳性结果判定。 本标准适用于入出境人员携带轮状病毒、星状病毒、诺如病毒、札如病毒的实验室检测。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 ＧＢ１９４８９　实验室生物安全通用要求 ＷＳ／Ｔ２３０　临床诊断中聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术的应用 ＳＮ／Ｔ１１９３　基因检验实验室技术要求 ＳＮ／Ｔ１７２０　出入境口岸轮状病毒感染监测规程 人间传染的病原微生物名录（中华人民共和国卫生部２００６年制定） ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 ３．１　 轮状病毒　犚狅狋犪狏犻狉狌狊 属于呼肠孤病毒科（犚犲狅狏犻狉犻犱犪犲）轮状病毒属（犚狅狋犪狏犻狉狌狊），其基因组由１１个不连续的双链ＲＮＡ 基 因片段组成，分别编码６种结构蛋白（ＶＰ１～ＶＰ４，ＶＰ６、ＶＰ７）和６种非结构蛋（ＮＳＰ１～ＮＳＰ６）。轮状病 毒有７个血清组（Ａ～Ｇ），其中Ａ、Ｂ、Ｃ 组能引起人和动物腹泻。 ３．２　 星状病毒　犃狊狋狉狅狏犻狉狌狊 属于星状病毒科（犃狊狋狉狅狏犻狉犻犱犪犲）哺乳类星状病毒属（犕犪犿犪狊狋狉狅狏犻狉狌狊），为单股正链ＲＮＡ 病毒，基因 组长约６．８ｋｂ，从５’端到３’端包括一个约８５个核苷酸的５’非编码区（５’ｎｏｎｃｏｄｉｎｇｒｅｇｉｏｎ，ＮＣＲ），三 个开放读码框架ＯＲＦ１ａ、ＯＲＦ１ｂ和ＯＲＦ２，一个约８０个核苷酸的３’非编码区和一个大约３０个核苷酸 的多聚腺苷酸尾。星状病毒是引起婴幼儿、老年人、免疫功能低下或缺失者急性腹泻的重要病原体。 ３．３　 诺如病毒　犖狅狉狅狏犻狉狌狊 诺瓦克样病毒　犖狅狉狑犪犾犽犾犻犽犲狏犻狉狌狊犲狊 诺沃克样病毒　犖狅狉狑犪犾犽犾犻犽犲狏犻狉狌狊犲狊 属于杯状病毒科（犆犪犾犻犮犻狏犻狉犻犱犪犲）诺如病毒属（犖狅狉狅狏犻狉狌狊），为单股正链ＲＮＡ 病毒，基因组长约 ７．６ｋｂ，包括３个开放阅读框（ｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｓ，ＯＲＦｓ）ＯＲＦｓ１、ＯＲＦｓ２和ＯＲＦｓ３。诺如病毒可分为 ５个型，分别为ＧＩ、ＧＩＩ、ＧＩＩＩ、ＧＩＶ 和ＧＶ，其中ＧＩ、ＧＩＩ和ＧＩＶ 感染人，是引起成人和婴幼儿急性非细菌 １ 犛犖／犜５１０８—２０１９ 性胃肠炎的重要病原体，全世界范围内均有流行，全年均可发生感染。 ３．４　 扎如病毒　犛犪狆狅狏犻狉狌狊 属于杯状病毒科（犆犪犾犻犮犻狏犻狉犻犱犪犲），为单股正链ＲＮＡ 病毒，核酸序列长约７．５ＫＢ，包括２个开放读 码框，ＯＲＦ１和ＯＲＦ２。ＳＶ 可分为５个遗传型，即ＧＩ、ＧＩＩ、ＧＩＩＩ、ＧＩＶ 和ＧＶ，除ＧＩＩＩ型感染猪外，其他 四型均感染人。 ３．５　 高分辨率熔解曲线分析技术　犺犻犵犺狉犲狊狅犾狌狋犻狅狀犿犲犾狋犻狀犵犪狀犪犾狔狊犻狊；犎犚犕犃 利用最新一代饱和荧光染料，实现分辨率高达０．０１ ℃的熔解曲线精确分析的技术。相对于传统的 ＰＣＲ 技术或实时荧光ＰＣＲ 技术而言，操作步骤大大简化，而且无需使用昂贵的探针，时间和成本也降 低了不少，并且样品经ＰＣＲ 扩增后直接进行ＨＲＭＡ 分析，无需转移，真正实现了闭管操作，降低了污 染的风险。 ４　缩略语 下列缩略语适用于本文件： ———ｂｐ：ｂａｓｅｐａｉｒ，碱基对； ———ＤＥＰＣ：ｄｉｅｔｈｙｌｐｙｒｏｃａｒｂｏｎａｔｅ，焦碳酸乙二酯； ———ＨＲＭＡ：ｈｉｇｈｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎｍｅｌｔｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓ，高分辨率熔解