ICS 65.020 B 40 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 2954—2019 畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 高效液相色谱法 2019 - 03 - 25发布 2019 - 04 - 25实施 河北省市场监督管理局 发布 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由衡水市质量技术监督局提出。 本标准起草单位：河北美创检测科技有限公司、衡水市食品药品检验检测中心、衡水市农业农村 局。 本标准主要起草人：耿春辉、崔婧、梁勃、段培姿、王晖、王哲、王权、路明、高晶、刘志祥、 陈宁。 畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定 高效液相色谱法 警告―使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问题。 使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。 1 范围 本标准规定了畜禽饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇高效液相色谱测定方法的原理、试剂、仪器和设备、 检测步骤、结果计算、准确度和精密度。 本标准适用于饲料原料、配合饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的测定。 本标准的方法检出限为10 μg/kg，定量限为20 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样中的脱氧雪腐镰刀菌烯醇用水和乙腈的混合溶液提取,经层析柱净化,浓缩、定容和过滤后用 高效液相色谱-紫外检测器测定,外标法定量。 4 试剂 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 4.1 甲醇(CH3OH，CAS号：67-56-1)，色谱纯。 4.2 乙腈(CH3CN，CAS号：75-05-8)，色谱纯。 4.3 正己烷(C6H14，CAS号：110-54-3)，色谱纯。 4.4 活性炭，120～400目。 4.5 酸性氧化铝，40～80目。 4.6 层析柱,内径10 mm ，长度150 mm，砂芯有活塞。 4.7 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品 (C15H20O6，CAS号：51481-10-8)，纯度 ≥99 %。 4.8 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储备液（1.0 mg/mL），准确称取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准品(4.7)10.0 mg于50 mL烧杯中，用乙腈溶解，转移到10 mL棕色容量瓶中，用乙腈定容。避光放置于4℃冰箱中， 有效期为6个月。 4.9 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准中间液（100 μg /mL），准确吸取10.0 mL脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准储 备溶液(4.8)于100 mL容量瓶中，用乙腈定容。避光放置于4℃冰箱中，有效期为1个月。 4.10 脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准工作液，分别准确吸取脱氧雪腐镰刀菌烯醇标准中间液(4.9)适量，用 水配制成1 μg/mL、2 μg/mL、5 μg/mL、10 μg/mL、20 μg/mL系列标准工作液。 5 仪器和设备 5.1 高效液相色谱仪，配有紫外检测器。 5.2 粉碎机。 5.3 涡旋混合器。 5.4 振荡器。 5.5 离心机，转速不低于5000 r/min。 5.6 超声波清洗机。 5.7 旋转蒸发仪。 5.8 天平，感量分别为0.1 g和0.01 mg。 6 检测步骤 6.1 样品 饲料原料或配合饲料。 6.2 试样制备 按GB/T 14699.1采集有代表性的样品，按GB/T 20195进行试样的制备，粉碎，通过0.85 mm试验筛， 装入密封的玻璃容器中，低温保存备用。 6.3 试样提取 称取试样25 g（精确至 0.01 g）置于250 mL具塞锥形瓶中，准确加入100 mL乙腈-水溶液（84+16）， 置于振荡器振荡30 min，5000 r/min离心5 min，收集上清液于干净的容器中备用， 取10.0 mL上清液置 于50 mL离心管中，加10.0 ml乙腈饱和正己烷溶液，涡