犐犆犛０７．０８０ 犌００ ! " # $ % & ' ' ( ) * 犌犅／犜３７８７４—２０１９ !"#$%&'()*+, 犌犲狀犲狉犪犾狉狌犾犲狊犳狅狉犲狏犪犾狌犪狋犻狅狀狅犳狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱犲狓狋狉犪犮狋犻狅狀犪狀犱狆狌狉犻犳犻犮犪狋犻狅狀犿犲狋犺狅犱狊 ２０１９０８３０-. ２０１９０８３０/0 ' ( + , - . / 0 1 2 !''()*3/0456 - . 目次 前言………………………………………………………………………………………………………… Ⅲ １　范围……………………………………………………………………………………………………… １ ２　规范性引用文件………………………………………………………………………………………… １ ３　术语和定义、缩略语……………………………………………………………………………………… １ ４　基本要求………………………………………………………………………………………………… ２ ５　指标参数………………………………………………………………………………………………… ２ ６　评价方法………………………………………………………………………………………………… ３ Ⅰ 犌犅／犜３７８７４—２０１９ 前　　言 　　本标准按照ＧＢ／Ｔ１．１—２００９给出的规则起草。 本标准由国家标准物质研究中心提出并归口。 本标准起草单位：中国科学院北京基因组研究所、中国计量科学研究院。 本标准主要起草人：孟庆姝、傅博强、胡松年、葛晓萌、谈昕煜、牛春艳、毕小春。 Ⅲ 犌犅／犜３７８７４—２０１９ 核酸提取纯化方法评价通则 １　范围 本标准规定了核酸提取纯化方法评价的指标参数和评价方法。 本标准适用于分子生物学实验室对于常规样本（新鲜样本）的核酸（基因组ＤＮＡ 与总ＲＮＡ）提取 纯化方法的一般性评价。 本标准不适用于病毒核酸的提取，游离ＤＮＡ 的提取，陈旧样本、微量样本与高度降解样本核酸的 提取方法的评价，也不适用于在提取过程中通过添加外源ＤＮＡ 或ＲＮＡ 以提高提取效率的核酸提取方 法的评价。 ２　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修订单）适用于本文件。 ＩＳＯ８６５５２：２００２　活塞式容量测量器　第２部分：活塞移液器（Ｐｉｓｔｏｎｏｐｅｒａｔｅｄｖｏｌｕｍｅｔｒｉｃａｐｐａ ｒａｔｕｓ—Ｐａｒｔ２：Ｐｉｓｔｏｎｐｉｐｅｔｔｅｓ） ３　术语和定义、缩略语 ３．１　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 ３．１．１ 核酸　狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱 由核苷酸或脱氧核苷酸通过３′，５′磷酸二酯键连接而成的一类生物大分子。具有非常重要的生物 功能，主要是贮存遗传信息和传递遗传信息。包括核糖核酸（ＲＮＡ）和脱氧核糖核酸（ＤＮＡ）两类。 ［ＪＪＦ１２６５—２０１０，定义４．４２］ ３．１．２ 标准物质　狉犲犳犲狉犲狀犮犲犿犪狋犲狉犻犪犾 具有足够均匀和稳定的特定特性的物质，其特性被证实适用于测量中或标称特性检查中的预期 用途。 ［ＪＪＦ１００１—２０１１，定义８．１４］ ３．２　缩略语 下列缩略语适用于本文件。 ＤＮＡ：脱氧核糖核酸（ＤｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ） ＥＤＴＡ：乙二胺四乙酸（Ｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ） ＯＤ：光密度（ＯｐｔｉｃａｌＤｅｎｓｉｔｙ） １ 犌犅／犜３７８７４—２０１９ ＲＮＡ：核糖核酸（ＲｉｂｏｎｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄ） ＴＥ：三羟甲基氨基甲烷乙二胺四乙酸（ＴｒｉｃａｒｂｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅＥｔｈｙｌｅｎｅｄｉａｍｉｎｅｔｅｔ ｒａａｃｅｔｉｃａｃｉｄ） Ｔｒｉｓ：三羟甲基氨基甲烷（Ｔｒｉｓｈｙｄｒｏｘｙｍｅｔｈｙｌａｍｉｎｏｍｅｔｈａｎｅ） ４　基本要求 常规的用于分子生物学提取核酸的样本主要包括新鲜的动植物组织样本、细胞样本、血液样本、唾 液样本和粪便样本等。宜选用新鲜样本进行核酸提取；若不能马上提取，应分装成小份，按照样本特性 与采集情况妥善保存。 ５　指标参数 ５．１　核酸完整度 ５．１．１　一般说明 核酸完整度表征提取过程中保持核酸一级结构（序列）完整而不发生改变的程度。在核酸提取时应 尽量防止物理（剪切力、高温）、化学因素（强酸、强碱）和生物因素（核酸酶）的破坏。根据试验条件和核 酸样品，可以选择琼脂糖凝胶电泳方法进行核酸完整度测定，根据条带位置和不同条带的荧光亮度分析 综合计算评价核酸的完整性。 ５．１．２　犇犖犃完整度 用琼脂糖凝胶电泳法检测，完整基因组ＤＮＡ 电泳结果为一条清晰明亮的条带，条带拖尾或者弥散 代表ＤＮＡ 有部分降解。 ５．１．３　总犚犖犃完整度 ５．１．３．１　真核生物总犚犖犃完整度 用琼脂糖凝胶电泳法检测，真核生物完整的总ＲＮＡ 电泳结果为清晰的两条条带２８Ｓ和１８Ｓ核糖 体ＲＮＡ 条带。２８Ｓ和１８Ｓ核糖体ＲＮＡ 条带清晰，且两条条带的荧光亮度比值（２８Ｓ∶１８Ｓ）＞１，以满足 后续试验的要求。 ５．１．３．２　原核生物总犚犖犃完整度 用琼脂糖凝胶电泳法检测，原核生物完整的总ＲＮＡ 电泳结果为清晰的两条条带２３Ｓ和１６Ｓ核糖 体ＲＮＡ 条带。２３Ｓ和１６Ｓ核糖体ＲＮＡ 条带清晰，且两条条带的荧光亮度比值（２３Ｓ∶１６Ｓ）＞１，该完整 度可以满足绝大部分后续试验的要求。 ５．１．３．３　总犚犖犃降解 用琼脂糖凝胶电泳法检测，如果电泳条带弥散，没有清晰的核糖体ＲＮＡ 条带，为部分降解的ＲＮＡ 样品；电泳条带呈现极低分子质量处的弥散状，为完全降解的ＲＮＡ 样品