附件辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测胶体金免疫层析法（KJ201801）12范围本方法规定了辣椒制品中苏丹红 I的胶体金免疫层析快速检测方法本方法适用于辣椒酱辣椒油辣椒粉等辣椒制品中苏丹红 I的快速测定原理本方法采用竞争抑制免疫层析原理样品中的苏丹红 I与胶体金标记的特异性抗体结合抑制了抗体和检测线（T线）上抗原的结合从而导致检测线颜色深浅的变化通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较对样品中苏丹红I进行定性判定3试剂和材料除另有规定外本方法所用试剂均为分析纯水为GB/T 6682规定的二级水3.1试剂3.1.13.1.23.1.33.1.43.1.53.1.63.1.73.1.8乙腈无水硫酸镁正己烷二氯甲烷氢氧化钠氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.5）8g用水溶解并稀释至 100mL无水乙醇复溶液：将无水乙醇（3.1.7）与水按照体积比 25:75混匀3.2参考物质3.2.1苏丹红 I参考物质的中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量见表 1纯度≥95%表 1苏丹红 I参考物质的中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量中文名称英文名称CAS登录号分子式相对分子量苏丹红ISudan I842-07-9C16H12N2O248.28注：或等同可溯源物质3.3标准溶液的配制—1——3.3.1苏丹红 I标准储备液（1mg/mL）：精密称取苏丹红I标准品（3.2.1）适量置于 10mL容量瓶中加入适量乙腈（3.1.1）超声溶解后用乙腈稀释至刻度摇匀制成浓度为1mg/mL的苏丹红Ⅰ标准储备液﹣20℃避光保存有效期6个月3.3.2苏丹红 I标准中间液（1μg/mL）：精密量取苏丹红I标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）100μL置于 100mL容量瓶中用乙腈（3.1.1）稀释至刻度摇匀制成浓度为1μg/mL的苏丹红I标准中间液3.4材料3.4.1固相萃取柱：CNW Poly-sery MIP-SDR固相萃取柱（200mg/3mL）或相当者3.4.2苏丹红 I胶体金免疫层析试剂盒适用基质为辣椒酱辣椒油辣椒粉3.4.2.13.4.2.2金标微孔试纸条或检测卡4仪器和设备4.14.24.34.44.54.64.75移液器： 200μL1mL和 5mL涡旋混合器离心机：转速≥ 4000r/min电子天平：感量为 0.01g氮吹仪水浴锅环境条件：温度15℃35℃湿度≤80%分析步骤5.1试样制备取适量样品液体样品或半固体样品充分混匀固体样品充分粉碎混匀5.2试样的提取5.2.1辣椒酱称取辣椒酱2g（精确至0.01g）于15mL离心管中加入0.5g无水硫酸镁（3.1.2）和5mL正己烷（3.1.3）提取液涡旋振荡1min后4000r/min离心5min将上清液全部加入到固相萃取柱（3.4.1）中流出液弃去再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱流出液弃去用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱收集洗脱液吹干精密加入400μL复溶液（3.1.8）涡旋混合1min作为待测液立即测定5.2.2辣椒油称取辣椒油5g（精确至0.01g）于15mL离心管中加入8mL正己烷（3.1.3）进行提取涡旋振荡1min后将上清液全部加入到固相萃取柱中流出液弃去再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱流出液弃去用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱收集洗脱液吹干精密加入400μL复溶液（3.1.8）涡旋混合1min作为待测液立即测定——2—5.2.3辣椒粉称取辣椒粉3g（精确至0.01g）于50mL离心管中加入8mL乙腈（3.1.1）提取涡旋振荡1min后6000r/min离心5min转移上清液于10mL离心管中吹干后加入2mL氢氧化钠溶液（3.1.6）涡旋混匀30s后置于80℃水浴皂化5min再加入2mL正己烷（3.1.3）涡旋萃取30s后6000r/min离心5min转移上清液于新的10mL离心管中加入无水硫酸镁（ 3.1.2）0.5g涡旋振荡30s后4000r/min离心5min转移上清液于10mL离心管中吹干精密加入400μL复溶液（3.1.8）涡旋混合1min作为待测