ICS65.080DB41G 20河 南 省地方标准DB41/T 1574—2018芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定高效液相色谱法2018-04-17发布2018-07-17实施河南省质量技术监督局发布DB41/T 1574—2018前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草本标准由河南省质量技术监督局提出本标准起草单位：河南省产品质量监督检验院本标准主要起草人：郭蕊孙晓霞丁国涛侣丽莎仵春赵海波鲍春铭IDB41/T1574—2018芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定方法本标准适用于以芝麻饼为原料经微生物发酵加工制成的芝麻饼肥中芝麻素和芝麻林素含量的测定本方法的检出限为：芝麻素0.02 mg/100 g；芝麻林素0.04mg/100 g2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法NY 525—2012有机肥料3方法提要试样中芝麻素芝麻林素经乙醇溶液超声提取以甲醇+水为流动相在波长287 nm处使用C18反相高效液相色谱柱进行分离外标法定量4鉴别试验本鉴别试验可与芝麻素（或芝麻林素）含量的测定同时进行在相同的色谱条件下试样溶液某一色谱峰的保留时间与标样溶液色谱图上芝麻素（或芝麻林素）色谱峰的保留时间其相对差值在 1.5%以内即可确认试样中含有芝麻素或芝麻林素当以上方法对芝麻素（或芝麻林素）鉴别有疑问时可采用其他有效方法进行鉴别5试剂和材料芝麻素标样：已知质量分数≥98.0%；芝麻林素标样：已知质量分数≥98.0%；甲醇：色谱纯；乙醇：优级纯8+2溶液；标准储备液：称取0.0100 g（精确至0.0001 g）芝麻素标样于100 mL容量瓶中加入80 mL乙醇溶液超声5min取出冷却至室温用乙醇溶液定容至刻度摇匀配制成 100μg/mL芝麻素标准贮备液于 4℃避光保存采用同样的方法称取0.0100g（精确到0.0001 g）芝麻林素标样配制成100μg/mL芝麻林素标准贮备液于4℃避光保存6仪器和设备高效液相色谱仪：具紫外可变波长检测器或二极管阵列检测器；1DB41/T1574—2018色谱数据处理机或色谱工作站；色谱柱：C18柱250mm×4.6 mm（i.d.)5μm或柱效相当的色谱柱；进样器：20μL；过滤器：滤膜孔径为0.45μm；涡旋混匀器；超声波振荡器；离心机7标准曲线的制备标准溶液的制备7.1准确量取1.0 mL2.0 mL5.0 mL10.0 mL20.0 mL40.0 mL芝麻素和芝麻林素标准储备液于100 mL容量瓶中用乙醇溶液定容至刻度摇匀其质量浓度为 1μg/mL2μg/mL5μg/mL10μg/mL20μg/mL50μg/mL的芝麻素芝麻林素混合标准溶液7.2色谱操作条件流动相：甲醇+水＝80+20经滤膜过滤并进行脱气；柱温：室温（温度波动应不大于2℃）；流速：1.0 mL/min；检测波长：287 nm；进样体积：5.0μL；保留时间：芝麻素约6.0 min芝麻林素约7.2 min以上操作参数是典型的可根据不同仪器特点对给定的操作参数作适当调整以期获得最佳分离效果（见图1）图1芝麻饼肥提取液高效液相色谱图2DB41/T1574—20187.3操作步骤在上述色谱条件下待仪器稳定后对标准溶液进行分析以芝麻素芝麻林素标准溶液浓度为横坐标以对应的峰面积为纵坐标绘制标准工作曲线得到线性方程按式（1）计算回归参数：y ??a??x?b………………………（1）式中：ya