ICS65.020.99DB34B 05安徽省地方标准DB 34/T 3308—2018 两系杂交水稻种子纯度检测 分子标记法 Protocol for purity detection of two-line hybrid seeds-molecular marker method 2018-12-29发布2019-01-29实施安徽省市场监督管理局发 布 DB34/T 3308—2018前言本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草本标准由安徽省种子质量监督检验站提出本标准由安徽省动植物检验检疫标准化委员会归口本标准起草单位：安徽省种子质量监督检验站合肥丰乐种业股份有限公司安徽省种子管理总站安徽出入境检验检疫局技术中心本标准主要起草人：周桂林胡晓玲吴晓亮曹玉洁周贤达张文晓范家萌周锐周红英宗凯张奇徐丽媛王凤杰胡娜王兆贤刘根熊成国王浩波I DB34/T 3308—2018两系杂交水稻种子纯度检测 分子标记法1范围本标准规定了两系杂交水稻种子纯度分子标记检测的原理实验步骤结果分析和报告本标准适用于两系杂交水稻种子纯度鉴定2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅所注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 3543.1农作物种子检验规程 总则GB/T 3543.2农作物种子检验规程 扦样GB/T 3543.5农作物种子检验规程 真实性和品种纯度鉴定GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法NY/T 1433水稻品种鉴定技术规程 SSR标记法3缩略语下列缩略语适用于本文件bp：base pair碱基对CTAB：cetyltrimethyl ammonium bromide十六烷基三甲基溴化铵DNA：deoxyribonucleic acid脱氧核糖核酸dNTPs：deoxyribonucleoside triphosphates脱氧核苷三磷酸PAGE：polyacrylamide gelelectrophoresis聚丙烯酰胺凝胶电泳PCR：polymerase chain reaction聚合酶链式反应SSR：simple sequence repeat简单序列重复Taq 酶：Taq-DNA polymerase耐热 DNA 聚合酶ddH2O：双蒸水（超纯水）4原理我国生产上两系水稻的不育基因主要为温敏核不育基因 tms5其次为光敏核不育基因 pms1pms3根据其对应的特征标记在品种中的等位基因型可判断该品种是否为两系杂交水稻或不育系同时水稻的不同品种其基因组存在着能够世代稳定遗传的重复次数不同的简单重复序列(SSR)且 SSR 标记具有共显性杂交种子具有双亲等位标记互补带型针对不同品种筛选其区别于其它品种的特征SSR标记通过 SSR 多态性分析可判断受检种子是否为杂交种并区别正常个体与异品种个体本标准综合利用两系不育基因特征标记和不同品种特征 SSR 标记鉴定一定数量送验样品中的正常个体数目或百分率从而对整体样品的一致程度作出评价1