ICS07.100C 04DB22备案号：54242-2017吉林省地方标准DB22/T 2565—2016流感病毒分离 MDCK细胞法The isolation and culture method for Influenza virus in MDCK cell2016-12-09发布2017-03-01实施吉林省质量技术监督局发 布 DB22/T 2565—2016前言 本标准根据GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2015给出的规则起草。本标准由吉林省卫生和计划生育委员会提出并归口。本标准起草单位：吉林省疾病预防控制中心。本标准主要起草人：李静、柳鸿敏、吴东林、臧希卉。I DB22/T 2565—2016流感病毒分离 MDCK细胞法 警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验，本标准并未指出所有可能的安全问题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。1范围本标准规定了无血清流感病毒分离MDCK细胞法。本标准适用于无血清流感病毒分离。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB 19489-2008实验室 生物安全通用要求3生物安全级别和生物安全要求3.1生物安全级别生物安全二级。3.2生物安全要求实验人员应穿戴医用防护服、防护鞋、医用防护口罩、工作帽、医用乳胶手套。4试剂和材料4.1无血清 MDCK细胞培养液4.2流感病毒分离无血清培养液4.3青、链霉素母液：含 10 000 U/mL青霉素G和10 000 μg/mL硫酸链霉素4.44.5EDTA-胰酶：胰酶浓度为 0.25%，EDTA·4Na浓度为0.53 mmol/LTPCK-胰酶（牛胰腺来源Ⅷ型）：2 mg/mL4.6磷酸盐缓冲液（PBS）：0.01mol/L，pH值为 7.2Hank’s液：pH值为 7.2～7.44.8病毒采样液：内带拭子T-25细胞培养瓶4.74.94.10无菌移液管：1 mL、10 mL4.11无菌离心管：1 mL、10 mL4.12乙醇溶液：70%～75%乙醇1