D B 12天津市地 方标准Screeningmethodfor genetically modifiedplantscp4-epspsteststrip本标准起草单位：天津市农业质量标准与检测技术研究所、中国农业科学院生物技术研究所、天津本标准主要起草人：兰青阔、李亮、赵新、沈晓玲、兰璞、王成、宛煜嵩、陈锐、黄凤军、李文、李益歌。转基因植物及其产品成分筛查cp4-epsps 试纸条法本标准规定了转基因植物及其产品成分cp4-epsps试纸条法的检测方法、结果判断。本标准适用于表达cp4-印sps蛋白的转基因大豆GTS 40-3-2、M0N89788，转基因玉米NK603、M0N88017,转基因棉花 M0N1445、M0N88913,转基因油菜GT73/RT73、苜蓿、甜菜等主要植物及其初级加工产品中cp4-epsps蛋白的试纸条筛查。下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。农业部2031号公告-19-2013转基因植物及其产品成分检测抽样转基因快速检测试纸应用双抗体夹心免疫层析的原理，样本中的抗原在侧向移动的过程中与标记的特异性单克隆抗体1结合，形成抗原-抗体复合物，继续向前方流动和NC膜检测线上特异性单克隆抗体2结合形成双抗体夹心复合物，并显色。如果样本中转基因作物含量大于5%，控制线 （Control Line，简称C) 和检测线 （TestLine，简称T)显色，结果为阳性；反之，控制线（C)显色，检测线（T)不显匀浆器；天平；移液枪；振荡器等。4 . 2 试剂5 . 1 取样按照农业部2031号公告-19-2013中的规定执行。5 . 2 样品的采集和预处理叶片等植物新鲜组织样品使用离心管盖夹取或者打孔的方式，采集生长点附近约3 cm幼嫩组织100mg?200 mg，置于2 mL离心管中，加1 mL纯水或提取缓冲液于离心管中，使用一次性研磨杵手工研磨或电钻研磨，确保上层液体体积应至少占总体积三分之一。作物籽粒等干样可使用研磨仪研磨或用铁钳夹碎，将粉末转移到2mL离心管中。对于混合样品，应称重后使用大容量研磨仪器研磨至100目大小粉末，然后加入500 mL水或提取缓冲液。在振荡器上用力震荡30 s?1 min，确保样品充分混匀。5 . 4 试纸条检测震荡后，静置1 min待固体物质沉淀分层，尽快从包装中取出试纸条，按照箭头方向插入离心管，开始计时。5 min?10 min底色褪去后，将试纸条水平放置于观察者正面读取结果。5 . 6 结果判断一一阴性（一）：控制线C显色，检测线T不显色；一一阳性（十）：控制线C显色，检测线T显色肉眼可见；一一无效：C线未出现，可能操作不当或试纸失效。表明操作过程不正确或试纸条己变质损坏。在此情况下，应重新测试。