ICS 65.020.30 ICS 65.020.30 DB22 吉 林省地 方标准 DB22/T 3038—2019 食用犬疫病实验室检测技术规程 Laboratory testing technical regulations of edible canine epidemic disease 2019-05-27发布 2019-06-17实施 吉林省市场监督管理厅 发布 本标准仅供内部使用 本标准仅供内部使用 印 本标准仅供内部使用 不得翻 印 前 言 前 言 DB22/T 3038—2019 本标准仅供内部使用 本标准仅供内部使用 印 本标准仅供内部使用 不得翻 印 DB22/T 3038—2019 食用犬疫病实验室检测技术规程 范围 本标准规定了食用犬主要疫病实验室检测技术的术语和定义、检测、废弃物处理和档案管理。 本标准适用于食用犬疫病实验室检测。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 18646-2018 动物布鲁氏菌病诊断技术 GB/T 27532-2011 犬瘟热诊断技术 GB/T 27533-2011 犬细小病毒诊断技术 GB/T 36789-2018 动物狂犬病病毒核酸检测方法 NY/T 1948 兽医实验室生物安全要求通则 NY/T 2961 兽医实验室 质量和技术要求 SN/T 4749-2017 犬传染性肝炎检疫技术规范 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 食用犬 edible dog 由人工养殖用做食用的犬只。 聚合酶链反应 polymerase chain reaction 对特定的DNA片段在体外进行快速扩增的检测方法。 4 检测 4.1 检测项目 布氏杆菌并犬瘟热、犬细小病毒并狂犬并犬传染性肝炎、钩端螺旋体病和利什曼玻 4.2 检测方法 4.2.1 布氏杆菌病 按 GB/T 18646-2018规定的 PCR 执行。 1 DB22/T 3038—2019 DB22/T 3038—2019 犬瘟热 按 GB/T 27532-2011 规定的 RT-PCR 执行。 犬细小病毒病 按 GB/T 27533-2011规定的 PCR 执行。 狂犬病 按 GB/T 36789-2018 规定执行。 犬传染性肝炎 按 SN/T 4749-2017 规定执行。 钩端螺旋体病 按附录 A 规定执行。 4.2.7 利什曼病 按附录 B 规定执行。 废弃物处理 按 NY/T 1948 规定执行。 档案管理 按 NY/T 2961 规定执行。 DB22/T 3038—2019 附 录 A 试剂 （规范性附录） 钩端螺旋体病荧光 PCR检测方法 本标准仅供内部使 用 A.1.1DNA 提取试剂盒。 A.1.2荧光 PCR 预混液。 A.1.3引物与探针，见表 A.1。 表A.1 引物与探针序列及浓度 步骤 核酸提取 名称 序列 浓度 不得翻印 上游引物 F CCCGCGTCCGATTAG 10 pmol/μL 下游引物 R TCCATTGTGGCCGRACAC 10 pmol/μL 探针 FAM-CTCACCAAGGCGACGATCGGTAGC-TAMRA 10 pmol/μL A.2 A.2.2 荧光PCR扩增体系 采集临床检测疑似病犬淋巴结，按DNA提取试剂盒方法提取DNA模板。 A.2.1 本标准仅供内部使 用 检测样本反应体系见表 A.2，同时设阴性、阳性对照。 表A.2 样品反应体系 体系组分 用 量 2╳PCR预混液 10.0 μL 无酶核酸水 5.9 μL 不得翻印 上游引物 F 0.8 μL 下游引物 R 0.8 μL 探针溶液 0.5 μL DNA模板 2.0 μL 总量 20.0 μL A.2.3 荧光PCR的扩增条件设置 将PCR管放入荧光