ICS 67 X 04 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 5159—2019 辣椒红中反式辣椒红素含量的测定 2019 - 12 - 27发布 2020 - 01 - 28实施 河北省市场监督管理局 发布 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由邯郸市市场监督管理局提出。 本标准起草单位：晨光生物科技集团股份有限公司、河北省食品检验研究院。 本标准主要起草人：杨清山、王红、陶晓青、张兰天、刘亚玲、李挥、季邵东、周丽、石文杰。 辣椒红中反式辣椒红素含量的测定 1 范围 本标准规定了辣椒红中反式辣椒红素的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于辣椒红中反式辣椒红素的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。 3 原理 反式辣椒红素是辣椒红的主要成分，属于类胡萝卜素类，其在辣椒红中的天然存在状态是反式辣 椒红素酯。反式辣椒红素酯经过碱液皂化后，均转化为游离的反式辣椒红素。使用紫外-可见分光光度 法测得辣椒红中的总类胡萝卜素含量，再使用高效液相色谱法测得反式辣椒红素在液相图谱中的面积 归一化比例，以总类胡萝卜素含量乘以反式辣椒红素比例得到反式辣椒红素含量。 4 试剂或材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 4.1 试剂 a) 正己烷（C6H14）：色谱纯； b) 甲醇（CH4O）； c) 无水乙醇（C2H6O）； d) 甲苯（C7H8）； e) 丙酮（C3H6O）：色谱纯； f) 乙酸乙酯（C4H8O2）：色谱纯； g) 氢氧化钾（KOH）； h) 无水硫酸钠（Na2SO4）。 4.2 试剂配制 4.2.1 萃取剂（HEAT）：将正己烷、无水乙醇、丙酮、甲苯按10:6:7:7的体积比例混合摇匀。 4.2.2 40%氢氧化钾—甲醇溶液（m/v）：取氢氧化钾 40g（精确至0.1g）于250mL烧杯中，加入约 10 mL水迅速用玻璃棒搅拌溶解后，加入甲醇50mL，搅拌至澄清，移入100 mL容量瓶中，用甲醇定容、 摇匀静置待用。其应为无色透明液。 4.2.3 10%无水硫酸钠溶液（m/v）：称量无水硫酸钠100g（精确至0.1g）于500mL烧杯中，加水溶 解后转移到1000mL容量瓶定容。 4.3 对照品 辣椒红素：（CAS: 465-42-9）：对照品，纯度≥90%。 4.4 标准溶液配制 辣椒红素对照品溶液：将适量对照品溶解至25 mL正己烷中，用作峰位置定性使用，置于-20℃冰 箱保存，有效期1年。 5 仪器和设备 a) 高效液相色谱仪（配备紫外检测器或其他等效检测器）； b) 紫外-可见分光光度计； c) 电子天平：感量为0.1 g和0.01 mg； d) 恒温水浴锅。 6 试验步骤 6.1 样品液制备 称取0.15g（精确至0.1mg）样品置于50 mL容量瓶中，用HEAT定容，摇匀后放在暗处静置10min。 移取5 mL到另一个100mL容量瓶中，再加入25 mLHEAT和4 mL40%的氢氧化钾—甲醇溶液。摇匀后放入25℃ 恒温水浴锅静置皂化30min。皂化完后加入30mL正己烷，用10%的无水硫酸钠定容。剧烈摇动2min放在 暗处静置1 h进行分层（分层后的上层溶液体积为50mL）。移取上清液5mL到50mL容量瓶，用正己烷定 容，得到紫外-可见分光光度计测试液。上清液过0.45μm有机滤膜后用作高效液相色谱仪测试液。 6.2 测定 6.2.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下： a) 色谱柱：硅胶填料，250 mm×4.6mm，5m，或性能相当者； b) 流动相：正己烷-丙酮-乙酸乙酯：74+11+15（体积比）； c) 柱温：40℃； d) 检测波长：474 nm； e) 流速：1.5mL/min； f) 进样量：20L。 6.2.2 测定 6.2.2.1 总类胡萝卜素含量测定 将