文本描述
版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准犛犖／犜１９９９ —２００７牛 病 毒 性 腹 泻粘 膜 病 抗 原 捕 获 酶 联 免 疫吸 附 试 验 操 作 规 程犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳犪狀狋犻犵犲狀犮犪狆狋狌狉犲犱 犲狀狕狔犿犲犾犻狀犽犲犱犻犿犿狌狀狅狊狅狉犫犲狀狋 犪狊狊犪狔犳狅狉 犫狅狏犻狀犲狏犻狉犪犾犱犻犪狉狉犺狅犲犪犿狌狊犮狅狊犪犾犱犻狊犲犪狊犲２００７１２２４ 发 布２００８０７０１ 实 施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布 版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售中 华 人 民 共 和 国 出 入境 检 验 检 疫行业标准牛 病 毒 性 腹 泻粘膜 病 抗 原 捕 获 酶 联 免 疫吸 附 试 验 操 作 规 程ＳＮ／Ｔ１９９９ —２００７中国 标准出 版社 出版北 京 复 兴 门 外 三 里 河北 街 １６号邮 政 编 码 ：１０００４５网 址 ｗｗｗ．ｓｐｃ电 话 ：６８５２３９４６ ６８５１７５４８中 国 标 准 出 版 社 秦 皇岛 印 刷 厂 印 刷开 本８８０ × １２３０ １／１６ 印 张０．５ 字 数千 字８２００８ 年 ２ 月第 一 版 ２００８ 年 ２ 月 第 一 次 印 刷印 数 １—２０００书 号 ：１５５０６６·２１８４５９ 定 价６．００元 版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜１９９９ —２００７前 言 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会提 出 并 归 口。本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 天 津 出入 境 检 验 检 疫 局。本 标 准 主 要 起 草 人 ：董 志 珍 、侯 艳 梅 、赵祥 平 、肖 妍 、霍 蕾。本 标 准 系 首 次 发 布 的 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标准。Ⅰ 版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜１９９９ —２００７牛 病 毒 性 腹 泻粘 膜 病 抗 原 捕 获 酶 联 免 疫吸 附 试 验 操 作 规 程１ 范 围本 标 准 规 定 了 牛 病 毒 性 腹 泻粘膜 病 抗 原 捕 获 酶 联 免 疫 吸 附试 验 （ＥＬＩＳＡ ）操 作 方 法 。本 标 准 适 用 于 牛 病 毒 性 腹 泻粘膜 病 抗 原 的 检 测。２ 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 条 款 通 过 本 标 准 的 引 用 而 成 为本 标 准 的 条 款 。 凡 是 注 日 期 的 引 用文 件 ，其 随 后 所 有的 修 改 单 （不 包 括 勘 误 的 内 容 ）或 修 订版 均 不 适 用 于 本 标 准 ，然 而 ，鼓 励 根 据 本 标 准 达 成 协 议 的 各 方 研 究是 否 可 使 用 这 些 文 件 的 最 新 版 本 。 凡 是 不 注 日 期的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 适 用 于 本 标 准。ＧＢ／Ｔ６６８２ 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 （ｎｅｑ ＩＳＯ ３６９６ ）３ 原 理以 边 界 病 病 毒 特 异 性 抗 体 包 被 酶 标 板 ，同时 加 入检 测 单 克 隆 抗 体 及样 品 ，样 品 即 与 两 种 抗ＢＶＤＶ体 结 合 ，形 成 抗 原 抗 体 结 合 物 ，洗 板 后再 加 入 二 抗 （与 抗 原 抗 体 复 合 物 结 合 ）及底 物 ，通 过 测 量 光 密 度 值而 确 定 样 品 的 结 果。４ 试 验 材 料４．１ 牛 病 毒 性 腹 泻粘膜 病 抗 原 捕 获诊 断 试 剂 盒犈犔犐犛犃２℃～８℃保 存 。 试 剂 盒 内 应 包 括 的 物 品 如 下：ａ） 牛病 毒 性 腹 泻粘膜 病 病 毒 多 克 隆 抗 体 包 被 板；ｂ） 抗 ＢＶＤＶ单 克 隆 检 测 抗 体；ｃ） ＢＶＤＶｄ） ＢＶＤＶ阳 性 对 照；阴 性 对 照；ｅ） 辣根 过 氧 化 物 酶 （Ｈ ＲＰ）标 记的 牛 抗 鼠 抗 体；ｆ） １０× 样 品 稀 释 液；ｇ） １０× 浓 缩 洗 液；ｈ） Ｔ Ｍ Ｂ 底 物 溶 液；ｉ） 终 止 液。４．２ 样 品 的 处 理４．２．１ 组 织４．２．１．１ 使 用 尽可 能 新 鲜 的 组 织 样 品 ，组 织 可 在 ２℃～ ８℃ 保 存１ 个 月 或 长 期 冷 冻 保 存 。 组 织 样 品最好 为 扁 桃 体 、脾 脏 、小 肠 及 肺 脏。４．２．１．２ 用 剪 子 将 １ ｇ～２ｇ 的 样 品 剪 碎 （２ ｍ ｍ ～５ ｍ ｍ）。４．２．１．３ 将 剪 碎 的 样 品 置 于 １０ ｍＬ的 离 心 管 中 ，加 入 ５ ｍＬ 样 品 稀 释 液 （１× ），混 匀 ，室 温 感 作 １ ｈ～２ｈ。４．２．１．４ １５００ ｒ／ｍｉｎ 离 心 １０ ｍｉｎ ，吸 取 ５０μＬ上 清 液 作 为 检 测 用 样 品 。 按 第 ７ 章 进 行 试 验。４．２．２ 外 周 血 液 白 细 胞４．２．２．１ 将 肝 素 或ＥＤＴＡ抗 凝 的 血 样 １０ｍＬ ，２ ０００ ｒ／ｍｉｎ 离 心 １５ ｍｉｎ ～２０ｍｉｎ 。１ 版权所有·禁止翻制、电子传阅、发售犛犖／犜１９９９ —２００７用移液器小心吸取血沉表层的淡黄色薄膜，重悬于５００Ｌ的 样 品 稀 释 液 中 ，每一４．２．２．２ １０００μＬμ个 样 品 换 一 个 吸 头 。 室 温 放 置 １ ｈ，在此 期 间 偶 尔 漩 涡 振 荡 一 次 ，下 面 继 续 ４．２．２．６ 的 操
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