GB/T 14931.2—1994中华人民共和国国家标准畜禽肉中己烯雌酚的测定方法Method for determination of diaethylstilbestrol in fleshGB/T 14931.2—19941主题内容与适用范围本标准规定了用高效液相色谱（HPLC）方法测定畜禽肉中己烯雌酚残留。本标准适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酚残留量测定。最小检出限1.25 ng（取样5g时，最小检出浓度0.25mg/kg）。2原理样品匀浆后，经甲醇提取过滤，注入 HPLC柱中，经紫外检测器鉴定。于波长230 nm处测定吸光度同条件下绘制工作曲线，己烯雌酚含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，样品与工作曲线比较定量。3试剂使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需过0.5umFH滤膜，无机试剂需过0.45um滤膜。3．1甲醇3．20.043mol/L磷酸二氢钠（NaH2PO4·2H2O）取1g磷酸二氢钠溶于水成500mL。3．3磷酸3．4己烯雌酚（DES）标准溶液：精密称取100mg己烯雌酚（DES）溶于甲醇，移入 100 mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含 DES1.0 mg，贮于冰箱中。3．5己烯雌酚（DES）标准使用液：吸取 10.00 mLLDES 贮备液，移入 100 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含 DES100 ug。4仪器4．1高效液相色谱仪：具紫外检测器。4．2小型绞肉机。4．3小型粉碎机。4．4电动振荡机。4．5离心机。5操作方法5．1提取及净化称取5 g（±0.1 g）绞碎（小于5 mm）肉样品，放入50mL具塞离心管中，加10.00 mL甲醇，充分搅拌，振荡20 min，于3000 r/min离心10min，将上清液移出，残渣中再加 10.00 mL 甲醇，混均后振荡 20 min，于 3000 r/min 离心10min，合并上清液，此时出现混浊，需再离心10min，取上清液过0.5umFH滤膜，备用。5．2色谱条件5．2．1紫外检测器检测波长230nm。中华人民共和国卫生部1994—01—24批准1994—08—01实施 GB/T 14931.2—19945．2．2灵敏度：0.04 AUFS。5．2．3流动相：甲醇：0.043mol/L磷酸二氢钠；70/30，用磷酸调pH=5（其中NaH2PO4·2H2O水溶溶液需过0.45 um滤膜）。5．2．4流速：1 mL/min。5．2．5进样量：20 uL。5．2．6色谱柱：CLC-ODS-C18（5 um）6.2 mm×150 mm不锈钢柱。5．2．7柱温：室温。5．3工作曲线绘制称取5份（每份5.0g）绞碎的肉样品，放入50mL具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准液（6.0,12.0,18.0,24.0 ug/mL）各 1.0 mL，同时做空白。其中甲醇总量为20.00mL，使其测定浓度为0.00,0.30,0.60,0.90,1.20ug/mL，按5.1处理方法提取备用。5．4测定分别取样 20 uL，注入 HPLC 柱中，可测得不同浓度 DES 标准溶液峰高，以DES浓度对峰高绘制工作曲线，同时取样液20uL，注入HPLC柱中，测得的峰高从工作曲线图中查相应含量，Rt=8.235。5．5计算X =A×1000m×V2V1式中：X——样品中己烯雌酚含量，mg/kg；A——进样体积中己烯雌酚含量，ng；m——样品的质量，g；V2——进样体积，uL；V1——样品甲醇提取液总体积，mL。5．6色谱图附加说明：中华人民共和国卫生部1994—01—24批准1994—08—01实施 GB/T 14931.2—1994本标准卫生部监督司提出。本标准由辽宁省食品卫生监督检验所、沈阳市卫生防疫站、鞍山市卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人翟永信、李学明、冯昕、吴百禄、刘春艳。本标准由生产卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。中华人民共和国卫生部1994—01—24批准1994—08—01实施