中华人民共和国国家标准食品中环己基氨基磺酸钠的测定方法GB/T 13112-91Method for determination of sodium cyclamate in foods━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━━1主题内容与适用范围本标准规定了食品中环己基氨基磺酸钠的三种测定方法──气相色谱法、比色法、薄层层析法。本标准气相色谱法及比色法适用于饮料、凉果等食品中环己基氨基磺酸钠的测定 ;薄层层析法适用于饮料、果汁、果酱、糕点中环己基氨基磺酸钠的含量测定，样品中含有0.1g/kg环已基氨基磺酸钠即可检出，最低检出量为3～4μg环己基氨基磺酸钠。第一篇气相色谱法2原理＿在硫酸介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸反应，生成环己醇亚硝酸酯 (〈〉-ONO)，￣利用气相色谱法进行定性和定量。3试剂本标准所用试剂，凡未指明规格者，均为分析纯(AR)，水为蒸馏水。3.1正己烷。3.2氯化钠。3.3层析硅胶（或海砂）。3.43.550g/L亚硝酸钠溶液。100g/L硫酸溶液。3.5环己基氨基磺酸钠标准溶液（含环己基氨基磺酸钠>98％）：精确称取1.0000g环己基氨基磺酸钠，加水溶解并定容至 100mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠10mg。4仪器4.1气相色谱仪附氢火焰离子化检测器。4.2旋涡混合器。4.3离心机。4.410μL微量注射器。4.5色谱条件4.5.1色谱柱：长 2m，内径 3mm,U形不锈钢柱。4.5.2固定相：Chromosorb W AW DMCS80～100目，涂以10％SE-30。4.5.3测定条件柱温：80℃；汽化温度：150℃；检测温度：150℃。流速：氮气 40 mL/min；氢气 30 mL/min；空气 300 mL/min。5样品处理5.1液体样品：摇匀后直接称取。含二氧化碳的样品先加热除去，含酒精的样品加 40g/L氢氧化钠溶液调至碱性，于沸水浴中加热除去，制成试样。5.2固体样品：凉果、蜜饯类样品将其剪碎制成试样。 6分析步骤6.1试料制备6.1.1液体试样：称取 20.0g试样于100 mL带塞比色管，置冰浴中。6.1.2固体试样：称取 2.0g已剪碎的试样于研钵中，加少许层析硅胶（或海砂）研磨至呈干粉状，经漏斗倒入 100 mL容量瓶中，加水冲洗研钵，并将洗液一并转移压容量瓶中，加水至刻度，不时摇动，1h后过滤，即得试料，准确吸取20mL于100 mL带塞比色管，置冰浴中。6.2测定6.2.1标准曲线的制备，准确吸取 1.00 mL环己基氨基磺酸钠标准溶液于100 mL带塞比色管中，加水 20 mL，置冰浴中，加入 5mL 50g/L亚硝酸钠溶液，5mL100g/L硫酸溶液,摇匀,在冰浴中放置 30 min，并经常摇动，然后准确加入 10 mL正己烷，5g氯化钠，摇匀后置旋涡混合器上振动 1min（或振摇 80次），待静止分层后吸出己烷层于10 mL带塞离心管中进行离心分离，每毫升已烷提取液相当 1mg 环己基氨基磺酸钠，将标准提取液进样 1～5μL于气相色谱仪中，根据响应值绘制标准曲线。6.2.2样品管按 6.2.1自“加入5mL 50g/L亚硝酸钠溶液……”起依法操作，然后将试料同样进样 1～5μL，测得响应值，从标准线图中查出相应含量。7计算A×10×1000X = ────────=───m×V×100010A..................(1)mV式中：X──样品中环己基氨基磺酸钠的含量，g/kg；m──样品质量, g；V──进样体积，μL；10──正己烷加入量，mL；A──测定用试料中环己基氨基硝酸钠的含量，μg。8精密度和允许误差重复测定变异系数<7％。两次平行测定相对允许误差绝对值≤10％，平行测定结果用算术平均值表示，保留二位小数。第二篇比色法9原理在硫胺介质中环己基氨基磺酸钠与亚硝酸钠反应，生成环己醇亚硝酸酯，与磺胺重氮化后再与盐酸萘乙二胺偶合生成红色染料，在 550 nm波长测其吸光度，与标准比较定量。10试剂10.1三氯甲烷。10.2甲醇。10.3透析剂：称取 0.5g二氯化汞和12.5g氯化钠于烧杯中，以 0.01 mol/L盐酸溶液定容至 100mL。10.410.510g/L亚硝酸钠溶液。100g/L硫酸溶液。 10.610.710.8100g/L尿素溶液（临用时新配或冰箱保存）。100g/L盐酸溶液。10g/L磺胺溶液：称取1g磺胺溶于10％盐酸溶液中，最后定容至100 mL。10 91g/L盐胺萘乙二胺溶液。10.10环己基氨基磺酸钠标准溶液：精确称取 0.1000g环己基氨基磺酸钠，加水溶解，最后定容至 100 mL，此溶液每毫升含环己基氨基磺酸钠 1mg。临用时将环己基氨基磺酸钠标准溶液稀释 10倍。此液每毫升含环己基氨基磺酸钠0.1mg。11仪器11.1分光光度计。11.2旋涡混合器。11.3离心机。11.4透析纸。12试样处理同第 5章。13分析步骤13.1提取13.1.1液体试料：称取 10.0g试料于透析纸中，加10 mL透析剂，将透析纸口扎紧，放入盛有 100 mL水的200 mL广口瓶内，加盖，透析20～24 h得透析液。13.1.2固体试料：准确吸取 10.0mL经“6.1.2”处理后的试料提取液于透析纸中，以下操作按“13.1.1”项下进行。13.2测定13.2.1取 2支50mL带塞比色管，分别加入 10mL透析液和10mL标准液，于0～3℃冰浴中，加入 1mL 10 g/L亚硝酸钠溶液，1mL100g/L硫酸溶液，摇匀后放入冰水中不时摇动，放置1h，取出后加 15 mL三氯甲烷，置旋涡混合器上振动1min，静置后吸去上层液，再加 15 mL水，振动 1min，静止后吸去上层液，加 10 mL 100 g/L尿素溶液，2mL100 g/L盐酸溶液，再振动 5min，静置后吸去上层液，加 15mL水，振动 1min，静置后吸去上层液，分别准确吸出 5mL三氯甲烷于2支