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版权所有·禁止翻制、电子发售 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛犖／犜２８６５ —２０１１ 尼 帕 病 毒 病 检 疫 技 术 规 范 犘狉狅狋狅犮狅犾狅犳狇狌犪狉犪狀狋犻狀犲犳狅狉犖犻狆犪犺 狏犻狉狌狊犱犻狊犲犪狊犲 ２０１１０５３１ 发 布 ２０１１１２０１ 实 施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜２８６５ —２０１１ 前 言 本 标 准 按 照 ＧＢ／Ｔ１．１—２００９ 给 出 的 规 则 起 草 。 本 标 准 参 考 了 世 界 动 物 卫 生 组 织 （ＯＩＥ ）《陆生 动 物 诊 断 试 验 与 疫 苗 标 准 手 册 》（２００４ 版）２．１０．１０ 条 “亨 得 拉 和 尼 帕 病 毒 病”。 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。 本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 山 东 出入 境 检 验 检 疫 局。 本 标 准 主 要 起 草 人 ：朱 来 华 、梁 成 珠 、郑小 龙 、岳 志 芹 、肖 西 志 、邓 明 俊 、谭 乐 义 、辛 学 谦。 Ⅰ 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜２８６５ —２０１１ 尼 帕 病 毒 病 检 疫 技 术 规 范 １ 范 围 本 标 准 规 定 了 尼 帕 病 毒 病 的 病 毒 分 离 鉴 定 、电镜 观 察 、免 疫 组 织 化 学 试 验 、微 量 血 清 中 和 试 验 、酶 联 免 疫 吸 附 试 验 等 检 疫 方 法。 本 标 准 适 用 于 进 出 境 动 物 尼 帕 病 毒 病 的 检 疫 。 ２ 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 注 日 期的 版 本 适 用 于 本 文 件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ，其 最 新 版 本 （包括 所 有 的 修 改 单 ）适 用 于 本 文 件。 ＧＢ／Ｔ６６８２ 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 ３ 概 述 ３．１ 尼 帕 病 毒 （Ｎｉｐａｈ ｖｉｒｕｓ，ＮｉＶ）病 是 一 种 新 出 现 的 人 畜 共 患 传 染 病 。 尼 帕 病 毒病 的 病 原 是 副 黏 病 毒 科 （Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）成 员 ，能 够 感 染 人 、猪 等 多 种 动 物 。 在猪 群 内 传 播 迅 速 ，症 状却 不 明 显 ，在 人 群 中 有 人 传 人 的 可 能 ，并 且 人 感 染ＮｉＶ 之 后 ，死 亡 率 高 达 ４０ ％ ～７０ ％ 。 ３．２ ＮｉＶ可 以 感 染 各 个 年 龄 段 的 猪 ，不 同 类 别 的 猪 表 现 出 不 同的 临 床 症 状 ，例 如 母 猪 首 先 表 现 为神 经 症 状 ，而 肉 用 猪 表 现 为 呼 吸 道 症 状 ，此外 ，圈 养 的 母 猪 和 公 猪 活 动 受 到 限 制 ，可 能 掩 盖 其 呼 吸 道 症 状。 ３．３ 人 、猫 、狗 和 马 也 可 以 感染 ＮｉＶ 。 人 感 染 后 ，多 数 以 神 经 症状 为 主 ，也 可 以 呼 吸 道 症 状为 主， ＮｉＶ 死 亡 率 很 高 ；狗 感 染 ＮｉＶ后 ，可 出 现 类 似 犬 瘟 热 症状 ；猫 感 染 ＮｉＶ后 ，死 亡 率 很 高 ；马感 染 ＮｉＶ后 可 以 出 现 神 经 症 状 ，但 是 死 亡 率 似 乎 较 低 。 所 以 在临 床 诊 断 时 ，应 注 意 感 染 的 猪 场 及 其 周 围 人 和 其 他 动 物 的 发 病 情 况 ，注 意 发 病 猪 场 新 近 是 否 引 进 新猪 。 因 尼 帕 病 毒 病 是 可 感 染 人 和 多 种 动 物 的 人 畜 共 患 传 染 病， 所 以 处 理 带 有 或 可 能 带 有 此 活 病 毒 的 样 品 必须 在 ＢＳＬ４ 生 物 安 全实 验 室 内 操 作。 ３．４ 死 后 剖 检 发 现ＮｉＶ 感 染 猪 没 有 特 征 性病 变 ，肺 和 脑 膜 是 主 要 的 病变 器 官 。 大 多 数 病 例 表 现 由 轻 微 到 严 重 的 肺 部 病 变 ，包 括 程 度 不 同的 实 变 、气 肿 、淤 血 性 溢血 以 及 呼 吸 道 有 带 血 丝的 分 泌 物 ，切 开 肺 部 ，可 见 肺 小 叶 间 隔 肿 胀 。 脑 膜 弥 漫 性 充 血 、水肿 ，其 他 的 内 脏 器 官 没 有 明 显 的 变 化。 ４ 病 毒 分 离 鉴 定 ４．１ 试 剂 、材 料 与 仪 器 ４．１．１ 试 剂 与 材 料 ：Ｖｅｒｏ 细 胞 或 ＲＫ１３细 胞 、Ｅ Ｍ Ｅ Ｍ 或 其 他 培 养 基 、抗 生 素 贮 存 液 、细 胞 消 化 液 、细 胞 培 养 液 和 细 胞 维 持 液 、细 胞 瓶 和 各 种 常 规试 剂 等 （见 附 录 Ａ ）。 试 验 用 水 应 符 合 ＧＢ／Ｔ６６８２要 求。 ４．１．２ 仪 器 ：生 物 安 全 柜 或 超净 工 作 台 、倒 置显 微 镜 、高 速 冷冻 离 心 机 、二 氧化 碳 培 养 箱 、高 压灭 菌 锅 等。 ４．２ 样 品 采 集 与 处 理 ４．２．１ 样 品 采 集 与 运 送 ：无 菌 采 集 动 物 脑 、肺 、肾和 脾 脏 等 组 织 ，４ ℃ 保 存 运 送 到ＢＳＬ４ 级 生物 安 全 实 １ 版权所有·禁止翻制、电子发售 犛犖／犜２８６５ —２０１１ 验 。 也 可 用 干 冰 保 存 运 送 ，但 病 料 不 能 长 期 存放 在 －２０ ℃。 ４．２．２ 样 品 处 理 ：无 菌 处 理 样 品 ，样 品 称 量 ，置 于 无 菌 密 闭容 器 内 ，加 入 少 量 组 织 培 养 液 和 抗 菌 素 ，用 无
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