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版权所有·禁止翻制、电子发售 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛犖／犜２８５２ —２０１１ 大 蒜 黑 腐 病 菌 检 疫 鉴 定 方 法 犐狀狊狆犲犮狋犻狅狀 犪狀犱 犻犱犲狀狋犻犳犻犮犪狋犻狅狀 狅犳 犈犿犫犲犾犾犻狊犻犪犪犾犾犻犻 （犆犪犿狆犪狀犻犾犲）犛犻犿 犿狅狀狊 ２０１１０２２５ 发 布 ２０１１０７０１ 实 施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 犛犖／犜２８５２ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 前 言 本 标 准 按 照 ＧＢ／Ｔ１．１—２００９ 给 出 的 规 则 起 草 。 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。 本 标 准 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国山 东 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中华 人 民 共 和 国 安 徽出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 国 检 验 检 疫 科 学 研 究 院。 本 标 准 主 要 起 草 人 ：王 英 超 、姚 剑 、封立 平 、魏 晓 棠 、严 进 、吴 兴 海 、余 冬 冬 、纪 瑛 、张 萍。 Ⅰ 犛犖／犜２８５２ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 大 蒜 黑 腐 病 菌 检 疫 鉴 定 方 法 １ 范 围 本 标 准 规 定 了 进 出 境 植 物 检 疫 中 大 蒜 黑 腐 病菌 检 疫 鉴 定 方 法。 本 标 准 适 用 于 进 出 口 大 蒜 、洋 葱 以 及 其 他葱 属 中 大 蒜 黑 腐 病 菌 的 检 疫 和 鉴 定。 ２ 原 理 ２．１ 分 类 学 地 位 大 蒜 黑 腐 病 菌 ［犈 犿犫犲犾犾犻狊犻犪 犪犾犾犻犻 （Ｃａｍｐａｎｉｌｅ）Ｓｉｍｍｏｎｓ ］属半 知 菌 亚 门 （Ｄｅｕｔｅｒｏｍｙｃｏｔｉｎａ），丝 孢 纲 （Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔｅｓ），丝 孢 目 （Ｈｙｐｈｏｍｙｃｅｔａｌｅｓ），暗色 孢 科 （Ｄｅｍａｔｉａｃｅａｅ），埃 里 砖 格 孢 属 （犈 犿犫犲犾犾犻狊犻犪 ）。 ２．２ 鉴 定 依 据 大 蒜 黑 腐 病 菌 的 形 态 特 征 、生 物 学 特 性 、寄主 范 围 （参 见 附 录 Ａ ）等 是 该 病 菌 检 疫 鉴 定 方 法 的 依 据。 ３ 仪 器 ３．１ 生 物 显 微 镜 （具 油 镜 镜 头 ）、具透 射 光 源 的 体 视 显 微 镜 （最 大 放 大 倍 数 不 低 于 ５０Ｘ）。 ３．２ 超 净 工 作 台。 ３．３ 电 子 天 平。 ３．４ 光 照 恒 温 培 养 箱。 ３．５ 高 压 灭 菌 器。 ３．６ 医 用 注 射 器 （１０ ｍＬ）及 针 头 （１８ 号）。 ３．７ 血 球 计 数 器。 ４ 药 品 试 剂 与 培 养 基 ４．１ 蒸 馏 水。 ４．２ 次 氯 酸 钠 或 乙 醇。 ４．３ ＰＤＡ培 养 基。 ５ 现 场 检 疫 ５．１ 直 观 检 查 重 点 检 查 是 否 有 腐 烂 、黑 色 霉 状 物 等 病 害症 状。 ５．２ 症 状 检 查 对 百 合 科 葱 属 ，尤 其 是 大 蒜 或 洋 葱 ，注意 检 查 蒜 瓣 或 洋 葱 上 是 否 有 形 状 不 规则 的 黑 色 凹 陷 病 斑 ，病 斑 表 面 是 否 有 稀 疏 黑 色 霉 状 物 ，病 斑 下 的组 织 是 否 变 黑 腐 ，症 状 图 参 见 附 录 Ｂ。 １ 犛犖／犜２８５２ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 ６ 实 验 室 检 验 ６．１ 分 生 孢 子 的 直 接 镜 检 观 察 对 于 有 形 状 不 规 则 的 黑 色 凹 陷 病 斑 ，病 斑表 面 有 稀 疏 黑 色 霉 状 物 等 症 状 的 大 蒜 或 洋 葱 ，直 接 挑 取 症 状 上 的 霉 状 物 镜 检 观 察。 ６．２ 病 菌 的 分 离 和 纯 化 对 于 症 状 不 明 显 的 葱 属 植 物 组 织 ，选 取 可疑 病 瓣 ，用 １％ 次氯 酸 钠 或 ７５ ％ 乙 醇 表 面 消 毒 ，用 无 菌 手 术 解 剖 刀 在 患 病 蒜 瓣 病 健 交 界 处 挑 取 ２ｍ ｍ × ２ ｍ ｍ ２２ 病 健 交 界 组 织 若 干块 ，将 组 织 置 于 无 菌 平 皿 中 ， 经 １％ 次氯 酸 钠 或 ７５ ％ 乙 醇 处 理 ２ ｍｉｎ～３ｍｉｎ，移入 无 菌 水 中 洗 三 次 ，最 后 接 种 于 ＰＤＡ培 养 基 平 板 上， 每 平 板 接 种 ５ 点 ，重 复 接 种 三 块 平 板 ，２５℃ 左 右 下 培 养 ５ ｄ ～ ７ ｄ，获 得 纯 培 养 。 随 后 进行 单 孢 分 离 ，得 到 单 孢 菌 株 ，进 行 形 态 学 鉴 定。 ６．３ 致 病 性 测 定 按 照 附 录 Ｃ 的 方 法 进 行 接种 试 验。 ７ 鉴 定 特 征 ７．１ 培 养 特 征 分 离 菌 株 在 ＰＤＡ培 养 基 上形 成 灰 黑 色 菌 落 ，平 铺 ，边 缘 整 齐 ，气 生 菌 丝 不 发 达。 ７．２ 分 生 孢 子 特 征 分 生 孢 子 梗 粗 壮 ，屈 膝 状 弯 曲 ，有 分 枝，着 生 分 生 孢 子 的 疤 痕 明 显 ；分 生 孢 子 单 生 ，黄 褐 色 ，多 数 椭圆 形 或 近 圆 柱 形 、正 直 ，少 数 弯 曲 呈Ｓ 形 或 Ｙ 形 ，具 有 暗 褐 色 横 隔 ４ 个～１０ 个 ，纵 隔或 斜 隔 ０ 个 ～ ２ 个 ，隔 膜 较 厚 。 孢 子 大 小 为 ２４ μｍ ～５６μｍ ×１０μｍ ～１７μｍ ，表 面 光 滑 或 微 粗 糙 。 分 生 孢 子 图 参见 附 录 Ｄ。 ７．３ 致 病 性 测 定 用 分 离 菌 株 接 种 蒜 瓣 。 无 伤 接 种 和 致 伤 接 种 均能 致 病 ，表 现 相 同 的 症 状 。 病 菌 自大 蒜 底 部 的 茎 盘 侵 入 ，蒜 瓣 基 部 首 先 显 症 。 致 伤 接 种 的蒜 瓣 在 接 种 ２ｄ
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