文本描述
版权所有·禁止翻制、电子发售 中 华 人 民 共 和 国 出 入 境 检 验 检 疫 行 业 标 准 犛犖／犜２７９７ —２０１１ 食 品 中 致 泻 大 肠 埃 希 氏 菌 检 测 犕犘犆犚犇犎犘犔犆 法 犇犲狋犲犮狋犻狅狀 狅犳犱犻犪狉狉犺犲犪犵犲狀犻犮 犈狊犮犺犲狉犻犮犺犻犪犮狅犾犻 犻狀 犳狅狅犱 — 犕犘犆犚犇犎犘犔犆犿犲狋犺狅犱 ２０１１０２２５ 发 布 ２０１１０７０１ 实 施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发布 犛犖／犜２７９７ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 前 言 本 标 准 按 照 ＧＢ／Ｔ１．１—２００９ 给 出 的 规 则 起 草 。 本 标 准 由 国 家 认 证 认 可 监 督 管 理 委 员 会 提 出并 归 口。 本 标 准 主 要 起 草 单 位 ：中 华 人 民 共 和 国 辽宁 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共 和 国 西 藏 出 入 境 检 验 检 疫 局 、中 华 人 民 共 和 国 黑 龙 江 出 入 境 检 验检 疫 局 、北 京 盈 九 思 科 技 发 展 有 限 公 司。 本 标 准 主 要 起 草 人 ：徐 君 怡 、曹 际 娟 、郑秋 月 、王 顺 芝 、高 小 博 、李 苏 龙 、李 建 民 、王 秋 艳 、赤列 加 措。 Ⅰ 犛犖／犜２７９７ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 食 品 中 致 泻 大 肠 埃 希 氏 菌 检 测 犕犘犆犚犇犎犘犔犆 法 １ 范 围 本 标 准 规 定 了 食 品 中 致 泻 性 大 肠 埃 希 氏 菌 ，包括 肠 产 毒 性 大 肠 杆 菌 、肠 致 病性 大 肠 杆 菌 、肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 、肠 侵 袭 性 大 肠 杆 菌 的Ｍ ＰＣＲＤ ＨＰＬＣ 检 测 方 法。 本 标 准 适 用 于 食 品 中 致 泻 性 大 肠 埃 希 氏 菌 ，包括 肠 产 毒 性 大 肠 杆 菌 、肠 致 病性 大 肠 杆 菌 、肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 、肠 侵 袭 性 大 肠 杆 菌 的Ｍ ＰＣＲＤ ＨＰＬＣ 快 速 检 测。 ２ 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 注 日 期的 版 本 适 用 于 本 文 件 ，凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ，其 最 新版 本 （包 括 所 有 的 修 改 单 ）适 用 于 本 文 件。 ＧＢ／Ｔ４７８９ ．６ 食 品 卫 生 微 生 物 学检 验 致 泻 大 肠 埃 希 氏 菌 检 验 ＧＢ／Ｔ６６８２ 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 ＧＢ １９４８９ 实 验 室 生 物 安 全 通用 要 求 ＧＢ／Ｔ２７４０３ 实 验 室 质 量 控 制 规 范 食 品 分 子 生 物 学 检 测 ＳＮ／Ｔ０９７３ 进 出 口 肉 及 肉 制 品 中 肠 出 血 性 大 肠 杆 菌 Ｏ１５７ ：Ｈ７ 检验 方 法 ３ 缩 略 语 下 列 缩 略 语 适 用 于 本 文 件。 ＰＣＲ （ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ）：聚合 酶 链 式 反 应 Ｍ ＰＣＲ （ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ ＰＣＲ）：多 重 ＰＣＲ Ｄ ＨＰＬＣ （ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏ ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ）：变 性 高 效 液 相 色 谱 ＴＥＡ Ａ ：三 乙 基 铵 乙 酸盐 ４ 生 物 安 全 措 施 为 了 保 护 实 验 室 人 员 的 安 全 ，应 由 具 备 资格 的 工 作 人 员 检 测 致 病 菌 ，所 有 培 养 物 应 小 心 处 置 。 应 按 照 ＧＢ １９４８９的 有 关 规 定 执 行。 ５ 废 弃 物 处 理 和 防 止 污 染 的 措 施 ５．１ 检 测 过 程 中 的 废 弃 物 需 经 １２１℃ 高 压 灭 菌 处 理 至 少 ３０ ｍｉｎ后 再 弃 置。 ５．２ 检 测 过 程 中 防 止 交 叉 污 染 的 措施 参 照 标 准 ＧＢ／Ｔ２７４０３ 的 规 定 执 行。 ６ 原 理 多 重 ＰＣＲ，又 称 多 重 引 物 ＰＣＲ或 复 合 ＰＣＲ，它 是 在 同 一 ＰＣＲ反 应 体 系 里 加 上 两 对以 上 引 物 ，同 时 １ 犛犖／犜２７９７ —２０１１ 版权所有·禁止翻制、电子发售 扩 增 出 多 个 核 酸 片 段 的 ＰＣＲ反 应 ，其反 应 原 理 ，反 应 试 剂 和 操 作 过 程 与 一 般ＰＣＲ相 同 。 Ｄ ＨＰＬＣ分 析 技 术 是 应 用 离 子 对 反 相 液 相 色谱 原 理 对 ＤＮ Ａ片 段 进 行 分 离 。 离 子对 采 用 三 乙 基 胺 乙 酸盐 缓 冲 溶 液 （ＴＥＡ Ａ ），核 苷 酸 片段 分 子 中 带 负 电 荷 的 磷 酸 根 基 团 与 分 子 中 带 正 电 荷 的 氨 基 发 生 静电 作 用 相 ＴＥＡ Ａ 互 吸 引 ，同 时 ＴＥＡＡ 分 子 中 的 三 个 乙 基 与 固定 相 Ｃ １８ 表 面 的 烷 基 发 生 疏 水 作 用 力 而 相 互 吸 引 ，通 过 流 动 相 中 的 乙 腈 的 梯 度 洗 脱 达 到 将 不 同 大 小 的 核苷 酸 片 段 分 离。 ７ 试 剂 和 材 料 除 另 有 规 定 外 ，所 有 试 剂 纯 度 应 为 色 谱 纯 ，水为 灭 菌 超 纯 水 。 所 有 试 剂 均 用 无ＤＮ Ａ 酶 污 染 的 容 器 分 装。 ７．１ 水 ：应 符 合 ＧＢ／Ｔ６６８２ 中 一 级 水 的 规 格。 ７．２ 犜犪狇 ＤＮ Ａ聚 合 酶。 ７．３ ｄＮＴＰ：ｄＡＴＰ、ｄＴＴＰ、ｄＣＴＰ 、ｄＧＴＰ 。 ７．４ １０× ＰＣＲ缓 冲 液 ：见Ａ ．１．１。 ７．５ 引 物 ：引 物 序 列 见 表Ａ ．１。 ７．６ ＴＥ 溶液 ：见 Ａ ．１．２。 ７．７ １０
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