ICS65.020 B15 中华人民共和国农业行业标准 NY/T2059—2011 灰飞虱携带水稻条纹病毒检测技术 免疫斑点法 Technical specification for the detection of rice stripe virus in small brown planthopper—Dot immunobinding assay 2011-09-01发布2011-12-01 实施 中华人民共和国农业部 发布   NY/T2059—2011 前言 本标准按照 GB／T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。 本标准起草单位：江苏省农业科学院植物保护研究所。 本标准主要起草人：周益军、周彤、范永坚、程兆榜。 Ⅰ   NY/T2059—2011 灰飞虱携带水稻条纹病毒检测技术免疫斑点法 1范围 本标准规定了灰飞虱携带水稻条纹免疫斑点检测方法。 本标准适用于灰飞虱携带水稻条纹病毒的检测。 2原理 硝酸纤维素膜在中性条件下有效地吸附生物大分子，将抗原吸附于硝酸纤维素膜后，进行抗原抗体 反应，当抗体与膜上的抗原结合后，通过再次结合有标记的抗抗体，经底物作用使斑点着色。 3试剂 除非另有说明，均使用分析纯试剂，水为蒸馏水。 3.1 碳酸钠( Na2 CO3) 3.2 碳酸氢钠( NaHCO3) 3.3 氯化钠( NaCI) 3.4 氯化钾( KCI) 3.5 磷酸二氢钾( KH2 PO4) 3.6 磷酸氧二钠( Na2 HPO4) 3.7 盐酸( HCI) 3.8 无水乙醇( EaOH) 3.9 过氧化氢( H2O2) 3.10 3.11 3.12 3.13 3.14 3.15 4-氯-1-萘酚 吐温 20（Tween-20） 脱脂奶粉 小牛血清蛋白(BSA) 辣根过氧化物酶 磷酸盐缓冲液(0.02 mol／L)：准确称取 40.00 g氯化钠(3.3)、1.00g氯化钾(3.4)、1.00g磷酸二 氢钾(3.5)和15. 00 g磷酸氢二钠(3.6)于2 500 mL的容量瓶中加水定容至刻度，用盐酸(3.7)调节 pH 至 7.5，4℃保存： 3.16 磷酸盐吐温20缓冲液(0.01 mol／L)：准确称取40. 00g氯化钠(3.3)，1.00 g氯化钾(3.4)、 1. 00 g磷酸二氢钾(3.5)和15.00 9 15.00g磷酸氢二钠(3.6)于 5 000mL的容量瓶中加水定容至刻度， 用盐酸(3.7)调节pH至7.5，再加入2.5mL吐温20 (3.11)，4℃保存。 3.17 包被缓冲液 (0.05 mol／L)：准确称取1.59g碳酸钠(3.1)和 2.93 g碳酸氢钠(3.2)于1000 mL 的容量瓶中加水定容至刻度，用盐酸(3.7)调节pH至9.6，4℃保存。 1%脱脂奶粉封闭液：准确称取 1.00 g脱脂奶粉(3.12)加入100 mL磷酸盐吐温 20缓冲液 (3.16)，混匀后 4℃保存。 3.18 3.19 2%小牛血清蛋白封闭液：准确称取 0.2 g小牛血清蛋白(3.13)加入100 mL磷酸盐吐温20缓冲 液(3.16)，混匀后 4℃保存。 1