中华人民共和国国家标准 GB5413.31—2013 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中脲酶的测定 2013-11-29发布 2014-06-01实施  GB5413.31—2013 前 言 本标准代替 GB/T 5413.31—1997《婴幼儿配方食品和乳粉脲酶的定性检验》。 本标准与 GB/T 5413.31—1997相比，主要变化如下： ——修改了标准的名称； ——增加了尿素溶液的贮存条件； ——增加了纳氏试剂的贮存条件； ——增加了判定结果的时限规定。 I  GB5413.31—2013 食品安全国家标准 婴幼儿食品和乳品中脲酶的测定 1范围 本标准规定了婴幼儿食品和乳品中脲酶的测定方法。 本标准适用于婴幼儿食品和乳品中脲酶的定性检验。 2原理 脲酶在适当酸碱度和温度条件下，催化尿素转化成碳酸铵。碳酸铵在碱性条件下生成氢氧化铵， 与纳氏试剂中的碘化钾汞复盐作用生成棕色的碘化双汞铵。 3试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682规定的三级水。 3.1试剂 3.1.1尿素（H2NCONH2）。 3.1.2钨酸钠（Na2WO4·2H2O）。 3.1.3酒石酸钾钠（C4H4O6KNa·4H2O）。 3.1.4硫酸（H2SO4）。 3.1.5磷酸氢二钠（Na2HPO4）。 3.1.6磷酸二氢钾（KH2PO4）。 3.1.7碘化汞（HgI2）。 3.1.8碘化钾（KI）。 3.1.9氢氧化钠（NaOH）。 3.2试剂配制 3.2.1尿素溶液（10g/L）：称取尿素 5 g，溶解于 500 mL水中。保存于棕色试剂瓶中，冰箱中冷藏， 有效期为 1个月。 3.2.2钨酸钠溶液（100g/L）：称取钨酸钠 50 g，溶解于 500 mL水中。 3.2.3酒石酸钾钠溶液（20g/L）：称取酒石酸钾钠 10 g，溶解于 500 mL水中。 3.2.4硫酸溶液（50mL/L）：吸取硫酸 25 mL，溶解于 500 mL水中。 3.2.5磷酸氢二钠溶液：称取无水磷酸氢二钠9.47 g，溶于 1000 mL水中。 3.2.6磷酸二氢钾溶液：称取磷酸二氢钾9.07 g，溶于 1000 mL水中。 3.2.7中性缓冲溶液：取磷酸氢二钠溶液611 mL，磷酸二氢钾溶液 389 mL，两种溶液混合均匀。 3.2.8碘化汞-碘化钾混合溶液：称取红色碘化汞55g，碘化钾41.25 g，溶于250 mL水中。 1  GB5413.31—2013 3.2.9 纳氏试剂：称取氢氧化钠144g溶于500 mL水中，充分溶解并冷却后，再缓慢地移入1000 mL 的容量瓶中，加入碘化汞-碘化钾混合溶液250 mL，加水稀释至刻度，摇匀，转入试剂瓶内，静置后， 用上清液。此试剂需棕色瓶保存，冰箱中冷藏，有效期为1个月。 4仪器和设备 4.1电子天平：感量为0.01 g。 4.2旋涡振荡器。 4.3恒温水浴锅：40℃±1℃。 5分析步骤 取试管甲、乙两支，各称入 0.10 g试样，再吸入1 mL水，振摇0.5 min（约 100次）。然后分别 吸入 1 mL中性缓冲溶液。向甲管（样品管）吸入 1 mL尿素溶液，再向乙管（空白对照管）吸入1 mL 水。两管摇匀后，置于 40℃±1℃水浴中保温 20 min。从水浴中取出两管后，各吸入 4 mL水，摇匀， 再吸入 1 mL钨酸钠溶液，摇匀，吸入 1 mL硫酸溶液，摇匀，过滤，收集滤液备用。取上述滤液2 mL， 分别吸入到二支 25 mL具塞的比色管中。再各吸入 15 mL水，1mL酒石酸钾钠溶液，和2 mL纳氏试 剂，最后用水定容至 25 mL，摇匀。5 min内观察结果。 6分析结果的表述 分析结果按表 1进行判断。 表1结果的判断 脲酶定性 强阳性 次强阳性 阳性 表示符号 ++++ +++ ++ 显示情况 砖红色混浊或澄清液 桔红色澄清液 深金黄色或黄色澄清液 淡黄色或微黄色澄清液 样品管与空白对照管同色或更淡 弱阳性 阴性 + － 7检出限 该方法为定性法，检出限为 0.7 U。 2