中华人民共和国国家标准 犌犅４７８９．２９—２０２０ 食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌 （椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验 ２０２００９１１发布２０２１０３１１实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会 国家市场监督管理总局发布 犌犅４７８９．２９—２０２０ Ⅰ　 前　　言 本标准代替ＧＢ／Ｔ４７８９．２９—２００３《食品卫生微生物学检验　椰毒假单胞菌酵米面亚种检验》。 本标准与ＧＢ／Ｔ４７８９．２９—２００３相比，主要变化如下： ———标准名称修改为“食品安全国家标准　食品微生物学检验　唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单 胞菌酵米面亚种）检验”； ———修改了范围； ———修改了设备和材料； ———修改了培养基和试剂； ———修改了检验程序； ———增加了结果报告； ———增加了附录Ａ。 犌犅４７８９．２９—２０２０ １ 　 食品安全国家标准 食品微生物学检验 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌 （椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验 １　范围 本标准规定了食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）［犅狌狉犽犺狅犾犱犲狉犻犪犵犾犪犱犻狅犾犻 （犘狊犲狌犱狅犿狅狀犪狊犮狅犮狅狏犲狀犲狀犪狀狊ｓｕｂｓｐ．犳犪狉犻狀狅犳犲狉犿犲狀狋犪狀狊）］的检验方法。 本标准适用于食品中唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）的检验。 ２　设备和材料 ２．１　实验室常规灭菌设备。 ２．２　冰箱：２ ℃～８ ℃、－２０ ℃～－３０ ℃。 ２．３　恒温培养箱：２６ ℃±１ ℃、３６ ℃±１ ℃。 ２．４　恒温水浴锅：４６ ℃±１ ℃。 ２．５　显微镜：１０倍～１００倍。 ２．６　均质器。 ２．７　离心机：３０００ｒ／ｍｉｎ。 ２．８　电子天平：感量０．１ｇ。 ２．９　比浊计。 ２．１０　锥形瓶：容量１００ｍＬ、５００ｍＬ。 ２．１１　无菌培养皿：直径９０ｍｍ、直径１５０ｍｍ。 ２．１２　无菌透明玻璃纸、滤纸。 ２．１３　无菌灌胃器：１ｍＬ。 ２．１４　微生物生化鉴定系统。 ２．１５　小鼠：１８ｇ～２０ｇ，每一批次试验应使用同一品系的ＫＭ 或ＩＣＲ 小鼠。 ３　培养基和试剂 ３．１　ＧＶＣ 增菌液：见Ａ．１。 ３．２　改良马铃薯葡萄糖琼脂（ｍＰＤＡ）：见Ａ．２。 ３．３　马铃薯葡萄糖琼脂（ＰＤＡ）：见Ａ．２．１。 ３．４　ＰＣＦＡ 培养基：见Ａ．３。 ３．５　马铃薯葡萄糖半固体琼脂：见Ａ．４。 ３．６　卵黄琼脂：见Ａ．５。 ３．７　革兰氏染色液：见Ａ．６。 ３．８　氧化酶试剂：见Ａ．７。 犌犅４７８９．２９—２０２０ ２ 　 ３．９　ＨｕｇｈＬｅｉｆｓｏｎ培养基（Ｏ／Ｆ试验用）：见Ａ．８。 ３．１０　蛋白胨水（靛基质试验用）：见Ａ．９。 ３．１１　缓冲葡萄糖蛋白胨水（ＭＲ 和ＶＰ试验用）：见Ａ．１０。 ３．１２　西蒙氏柠檬酸盐培养基：见Ａ．１３。 ３．１３　苯丙氨酸培养基：见Ａ．１４。 ３．１４　糖发酵管：见Ａ．１５。 ３．１５　半固体琼脂：见Ａ．１６。 ３．１６　抗Ｏ 多价血清、型特异性因子血清（ＯⅢ、ＯⅣ、ＯⅤ、ＯⅥ、ＯⅦ、ＯⅧ）。 ３．１７　生化鉴定试剂盒。 ４　检验程序 唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验程序见图１。 图１　唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）检验程序 犌犅４７８９．２９—２０２０ ３ 　 ５　操作步骤 ５．１　样品处理 无菌操作称取２５ｇ（ｍＬ）样品，置入盛有２２５ｍＬＧＶＣ 增菌液的无菌均质袋中（鲜银耳样品取１ｇ， 用剪刀剪碎，加入盛有２０ｍＬＧＶＣ 增菌液的无菌均质袋中），用拍击式均质器拍打１ｍｉｎ～２ｍｉｎ；或置 入盛有２２５ｍＬＧＶＣ 增菌液的无菌均质杯中，以８０００ｒ／ｍｉｎ～１００００ｒ／ｍｉｎ均质１ ｍｉｎ～２ ｍｉｎ；若样 品为液态，振荡混匀。 ５．２　增菌 将上述样品增菌液置３６ ℃±１ ℃培养２０ｈ～２４ｈ。 ５．３　分离 用直径３ｍｍ 的接种环取增菌液一环，分别划线接种于ｍＰＤＡ 平板和ＰＣＦＡ 平板，３６ ℃±１ ℃培 养２４ｈ～４８ｈ。观察各个平板上生长的菌落，各个平板上菌落特征见表１。 表１　唐菖蒲伯克霍尔德氏菌（椰毒假单胞菌酵米面亚种）在不同分离平板上的菌落特征 培养基菌落特征 ｍＰＤＡ 平板 培养２４ｈ后，菌落１ ｍｍ～２ ｍｍ，紫色，光滑、湿润、边缘整齐；培养４８ｈ后，部分 菌落中心可有呈草帽状凸起 ＰＣＦＡ 平板培养２４ｈ后，菌落０．５ｍｍ～１ｍｍ，灰白色，光滑、湿润、边缘整齐 卵黄琼脂平板 培养２４ｈ后，。。。。。。以下内容略