ICS 65.020.20 B 16 DB6111 杨凌农业高新技术产业示范区地方标准 DB 6111/T 149—2020 猕猴桃花粉溃疡病菌活菌检测技术规程 DetectionofLivingPseudomonassyringaepv. actinidiaefromKiwifruitpoLLen 2020-10-15发布2020-11-01实施 杨凌示范区市场监督管理局发布 DB6111/T 149—2020 前言 本文件是依据GB/T 1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》给出的 规则起草。 本文件由西北农林科技大学提出。 本文件由杨凌农业标准化专业技术委员会归口。 本文件起草单位：西北农林科技大学、陕西省猕猴桃工程技术研究中心、杨凌现代农业产业标准化 研究推广服务中心。 本文件主要起草人：黄丽丽、徐亮胜、雷玉山、高小宁、冯浩、王娜娜。 本文件由西北农林科技大学负责解释。 本文件为首次发布。 单位：西北农林科技大学 电话：029-87091312 地址：陕西省杨凌区邰成路西北农林科技大学 邮编：712100 DB6111/T 149—2020 猕猴桃花粉溃疡病菌活菌检测技术规程 1范围 本文件规定了猕猴桃花粉中活性溃疡病菌（Pseudomonas syringae pv. Actinidiae，Psa）检测方 法的原理、检测方法、检测样品与菌株保存、结果记录与资料保存的要求和内容。 本文件适用于活性溃疡病菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682-2008分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 23621-2009农业植物检疫实验室基础条件 SN/T 0168-2015进出口食品中菌落总数计数方法 SN/T 0800.1-2016进出口粮油、饲料检验抽样和制样方法 3原理 猕猴桃为雌雄异株植物，雌雄株之间必须通过授粉才能坐果，花粉中可以携带活性溃疡病菌。本文 件利用常规生物学鉴定方法和菌落PCR检测方法对花粉中溃疡病菌进行检测，为阻止猕猴桃细菌性溃疡 病菌的传播提供技术支撑。 4检测方法 4.1实验室要求 猕猴桃细菌性溃疡病菌检测所用实验室的设置与管理符合GB/T 23621—2009要求。除另有规定外， 本标准中的所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB 6682中一级水的规格。病原菌培养及 鉴定所需试剂见附录B。 4.2检验程序及鉴定方法 猕猴桃花粉Psa活菌检验程序见图1。 4.2.1操作步骤 4.2.1.1检测样品抽取 见SN/T 0800.1-2016。 4.2.1.2抽样数量 DB6111/T 149—2020 10瓶（件）以下，逐瓶抽取，10瓶～100瓶，随机选10瓶抽取样品；100瓶以上，按照一批花粉总瓶 数的平方根数抽取，见公式（1）。每瓶（件）抽取 2g花粉。 ...................................................................................(1) 式中： N—一批花粉总瓶 (件)数。 n—应抽取瓶（件）数（取整数，小数部分向上约）。 检样 稀释 平板接种 总菌落计数 PCR确认试验 检测报告 图 1猕猴桃花粉 Psa活菌检验程序 4.2.2抽样方法 无菌条件下将装花粉的容器充分震荡，使容器内花粉充分混匀；容器表面用75 %乙醇在包装口擦拭 消毒，待10min～15min后，用无菌药匙取2 g花粉于无菌的10mL离心管中，每瓶（件）花粉需换用1 把药匙。-20 ℃～40 ℃保存备用。 4.2.3样品制备 4.2.3.1制备样品匀液 无菌操作称取1 g样品，加入装有9mL的灭菌双蒸水的和适量玻璃珠的50mL稀释瓶中，迅速振摇， 将样品混匀，制成1:10的样品匀浆液。振摇时振幅为30 cm，7 s内振摇25次，。。。。。。以下内容略