申请代码： C03011403 受理部门： 收件日期： 受理编号： 30401835 国家自然科学基金 申 请 书 资助类别：面上项目 亚类说明：青年科学基金项目 附注说明： 项目名称：重组表达 HIV-1 多表位基因的 BCG 菌株修饰的树突状细胞疫苗 的实验研究 申 请 者：王福祥 电话： 029-83377595 依托单位：中国人民解放军第四军医大学 通讯地址：陕西省西安市长乐西路 17 号 邮政编码：710032 单位电话：029-83374194 电子邮件：wangfuxiang999@sohu 申报日期： 2004年3月18日 国家自然科学基金委员会 国家自然科学基金申请书 基本信息 0Qg9YegQpTB 王福祥 出生 姓名 性别 男 1971 年 8 月 民族 汉族 申 年月 请 学位 博士 职称 主治医师 主要研究领域 AIDS 疫苗 者 电话 029-83377595 电子邮件 wangfuxiang999@sohu 信 传真 个人网页 息 工作单位 中国人民解放军第四军医大学 /唐都医院传染科 在研项目批准号 依 中国人民解放军第四军医大学 托 名称 代 码 71003202 单 位 联系人 刘勇 电子邮件 liuyong@fmmu.edu 信 息 电话 029-83374194 网站地址 fmmu.edu 合 作 单 位 名 称 代 码 单 位 信 息 重组表达HIV-1多表位基因的BCG菌株修饰的树突状细胞疫苗的实验研究 项目名称 项 资助类别 面上项目 亚类说明 青年科学基金项目 目 基 附注说明 C03011403:传染病的预防与治 本 申请代码 疗研究 信 基地类别 息 预计研究年限 2005 年 1 月 — 2007 年 6 月 研究属性 应用基础研究 申请经费 21.0000 万元 项目研究内容和意义简介（限 400 字）：为了防止 HIV 感染在全球的曼延，迫切需要一种安 全、有效的疫苗来阻止艾滋病的流行。本研究构建 HIV-1 多表位基因分枝杆菌-大肠杆菌穿 摘 梭表达质粒（重组 BCG），并将重组 BCG 转染树突状细胞，以重组表达 HIV-1 多表位基因的 BCG 菌株修饰的树突状细胞疫苗免疫接种小鼠，评价其诱导的体液和细胞免疫反应效果。由 于这种疫苗首先，将高度保守的 CTL 表位基因和中和表位基因引入多表位基因疫苗的设计， 多重的抗病毒活性可以对付 HIV-1 的变异，防止 HIV-1 感染；其次，这种疫苗使用 BCG 载 体运输目的基因直接进入抗原提呈细胞，以利于目的基因在抗原提呈细胞中表达和提呈。 要 最后，重组 BCG 在体外转染树突状细胞，绕过树突状细胞免疫功能低下，诱导出更强有力 的免疫应答，这对 HIV 的防治具有重要意义。 关 键 词(用分号分开，最多 5 个) HIV-1,多表位基因，重组 BCG，树突状细胞疫苗 第 2 页 版本 1.027.588 国家自然科学基金申请书 项目组主要成员(杰出青年科学基金不填此栏) 每年工 编号 姓 名 出生年月 性别 职 称 学 位 单位名称 电话 电子邮件 项目分工 作时间 （月） 张颖 中国人民解放军第四军医大 029 1 1975-8-15 女 讲师 博士 学 （ 83377595 zyfmmu@sohu 分子克隆 6 ） 王临旭 中国人民解放军第四军医大 029 wanglinxu@hotmail.co 细胞转染及 2 1969-12-7 女 讲师 博士 学 （ 83377595 m 表达产物鉴 6 ） 王平忠 中国人民解放军第四军医大 029 wangpingzhong@hotmai 3 1964-7-18 男 讲师 博士 学 （ 83377595 l 动物免疫 6 ） 李光玉 中国人民解放军第四军医大 029 动物实验及 4 1970-9-8 男 实验师 博士 学 （ 83377595 liguangyupl@sina 免疫学检测 6 ） 刘娟 中国人民解放军第四军医大 029 liujuanfmmu@hotmail. 5 1972-9-11 女 讲师 博士 学 （ 83377595 com 免疫学检测 6 ） 6 7 8 9 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 6 6 说明: 1. 高级、中级、初级、博士后、博士生、硕士生人员数由申请者负责填报，总人数自动生成。 说明: 2. 项目组主要成员不包括项目申请者。 第 3 页 版本 1.027.588 国家自然科学基金申请书 经费申请表 （金额单位：万元） 科目 申请经费 备注（计算依据与说明） 一.研究经费 17.5000 1.科研业务费 3.5000 （1）测试/计算/分析费 0.5000 （2）能源/动力费 0.5000 （3）会议费/差旅费 1.0000 （4）出版物/文献/信息传播费 1.0000 （5）其它 0.5000 2.实验材料费 14.0000 多表位基因及合成肽 6 万元，工具酶，细胞培养及 （1）原材料/试剂/药品购置费 14.0000 细胞因子 3 万元，细胞因子检测盒 3 万元 （2）其它 实验耗材及实验动物 2 万元 3.仪器设备费 0.0000 （1）购置 （2）试制 4.实验室改装费 5.协作费 二.国际合作与交流费 2.0000 1.项目组成员出国合作交流 2.0000 2.境外专家来华合作交流 三.劳务费 1.0000 四.管理费 0.5000 合 计 21.0000 国家其他计划资助经费 与本项目相关的 其他经费资助（含部门匹配） 其他经费来源 其他经费来源合计 0.0000 第 4 页 版本 1.027.588 国家自然科学基金申请书 报告正文 （一）立项依据与研究内容 1. 项目的立项依据 研究意义 据联合国艾滋病规划署（UNAIDS）资料，在艾滋病流行的 20 年里，全世界已有 6200 万人感染了人类 获得性免疫缺陷病毒（HIV），其中 1/3 已经因艾滋病或 HIV 感染相关疾病死亡。尽管目前公认疗效较好的 高效抗逆转录病毒治疗（HAART）在抗 HIV 感染中取得一定效果，但由于药物昂贵和 HIV 耐药株的产生影响 了艾滋病治疗，限制了其在发展中国家使用。因此，最终将需要一种有效的疫苗策略成功地控制 HIV 感染 的流行及传播。至今，人类仍未研究出一种能有效防止 HIV-1 感染的疫苗，其原因在于这些疫苗只能诱导 很弱的针对野生病毒株的中和抗体。而且，由于编码 HIV-1 包膜蛋白的序列容易变异，诱导中和性抗体中 和病人广泛的病毒株是很困难的。因此，需要寻求一种有效的 AIDS 疫苗策略，既可以诱导中和性抗体以清 除 HIV-1 感染，又可以刺激细胞性免疫应答，尤其能够诱导和维持 HIV-1 特异性 CTL 应答，降低 HIV-1 病 毒载量，减缓疾病进展。 国内外研究现状及分析 AIDS 疫苗研究进展 AIDS 减毒活疫苗（live attenuated vaccines）是通过不同的方法手段，使病毒的毒力，即致病性 减弱或丧失，疫苗由完整的病毒组成。机体在接受了该疫苗后不发生，或出现很轻的临床症状，其刺激机 体的免疫系统产生针对该病毒的免疫反应，在以后暴露于该病毒时，保护机体不患病或患病的临床过程较 轻。由于 HIV-1 变异快，人们担心减毒活疫苗由于病毒遗传学改变的积累可能最终恢复其致病性。HIV-1 减毒活疫苗的可能致病性减弱了人们对这种疫苗策略的热情。 AIDS 灭活疫苗（Inactivated virus vaccine）又称死疫苗，是由完整病毒组成，即用灭活剂处理活 病毒，使其致病性丧失或减弱，但是仍然保持病毒的全部或部分免疫原性，接种疫苗后，病毒抗原可刺激 机体产生免疫应答，达到保护作用。由于灭活疫苗所使用的病毒在制备过程中缺失了病毒包膜大部分，虽 然它是安全的，但是没有明显的证据证实这种疫苗是有效的。 基因工程亚单位疫苗（gene engineered subunit vaccine）指用基因工程表达的蛋白抗原制成的疫 苗，通常这些抗原必须进行纯化。目前常用于表达外源基因的主要有细菌、酵母、哺乳动物细胞、昆虫细 胞等系统。基因工程亚单位疫苗是