ICS65.120DB41B 46河南省地方标准DB41/T 1586—2018 饲料中志贺氏菌的检测 EMA-PCR法 2018-04-17发布2018-07-17实施河南省质量技术监督局发 布 DB41/T 1586—2018前言本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草本标准由河南省畜牧局提出并归口本标准起草单位：河南省兽药饲料监察所郑州中道生物技术有限公司本标准主要起草人：高延玲李金磊狄元冉董鹏孟伟刘素梅曲登峰本标准参加起草人：方忠意刘占通刘素梅韩楠张杰巩丹王乐范念亭张艳娜张崇威王丽孟祥I DB41/T 1586—2018饲料中志贺氏菌的检测 EMA-PCR法1范围本标准规定了饲料中志贺氏菌的EMA-PCR检测方法本标准适用于饲料中志贺氏菌的检测2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的凡是注日期的引用文件仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 8381.2 饲料中志贺氏菌的检测方法GB/T 14699.1 饲料 采样3原理叠氮溴化乙锭（EMA）能够透过死细菌的细胞膜在强光照射下可与其DNA发生不可逆转的结合使死细菌DNA不能作为模板进行PCR扩增而活菌能进行PCR扩增4试剂和材料4.1除另有规定外试剂为分析纯或生化试剂试验用水符合GB/T 6682一级水的要求4.2GN增菌液：见附录A的A.14.32×Premix Taq缓冲液：内含TaqDNA聚合酶1.25U/25μL4mmol Mg dNTP各0.4mmol2+4.4特异性引物(对) 序列为：a）上游引物：5＇-TTG CTG CTG ATG CCA CTG AGA-3＇；b）下游引物：5＇-CCA GAG GGA GAA CCA GTC CTT A-3＇4.5琼脂糖：电泳级4.6Marker 20004.7志贺氏菌ATCC 120224.850×TAE缓冲液：见附录A的A.24.96×上样缓冲液：见附录A的A.34.10叠氮溴化乙锭（EMA0.2mg/mL）：见附录 A的A.44.11溴化乙锭（10mg/mL）4.12灭菌离心管：1.5mL15mL5仪器设备1