ICS 65.020.30 B 44 DB12 天 津 市地方 标 准 DB12/T 862—2019 水产微生态制剂乳酸菌生产技术规程 Aquatic probiotics --- Technical regulation for production of lactic acid bacteria 2019-01-14 发布 2019-02- 15 实施 天津市市场监督管理委员会 发布  刖 言 本标准依据GB/T 1.1—2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求起草。 本标准由天津市农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：天津市农业生物技术研究中心。 本标准主要起草人：谢凤行、张峰峰、周可、赵琼、赵玉洁、孙海波、高宝山。  水产微生态制剂乳酸菌生产技术规程 i范围 本标准规定了乳酸菌生产中所涉及的术语和定义、生产环境和设备要求、生产技术流程、质量检测 和储运。 本标准适用于水产微生态制剂乳酸菌的生产。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 3095环境空气质量标准 GB 3838地表水环境质量标准 GB 20287农用微生物菌剂 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 乳酸菌lactic acid bacteria 能利用碳水化合物产生乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，在水产养殖中可作为饲料 添加剂和水质净化剂。 注：本标准中涉及的乳酸菌主要包括植物乳杆菌（lactobacillus plantarum)、嗜酸乳杆菌（lactobacillus acidophilus)、戊糖乳杆菌（lactobacillus pentosus)、德氏乳杆菌（lactobacillus leichmannii)和粪肠球 菌（enterococcus faecalis)。 3.2 原菌种the original strain 由单菌落分离纯化，并在试管上穿刺繁殖保存的菌种。 3.3 —级菌种 first class strain 原菌种在培养皿上活化，挑取单菌落接种至玻璃瓶中，并厌氧培养的菌种 3.4 二级菌种 second class strain 玻璃瓶中的菌种接种至种子罐中，在种子罐中厌氧放大培养的菌种。 4生产环境和设备要求 4.1生产环境  4.1.1厂区空气质量应符合大气环境质量标准GB 3095中II类要求。 4 1.2发酵用水应符合地表水环境质量标准GB 3838中III类水质要求，冷却水及其他用水符合该标准 中IV类水质要求。 4.1.3生产车间配备消毒灭菌设施，菌种储藏室和无菌操作间与生产车间分开。 4.2生产设备 生产设备需为不锈钢发酵罐，体积根据生产规模自定。 5生产技术流程 5.1生产流程 见附录A。 5.2菌种质量 5.2.1用于发酵的菌种应有菌种鉴定报告或菌株来源相关信息。 5.2.2发酵前应先检测菌种的纯度和性能，如不纯或退化，应先进行提纯复壮。 5.2.3菌种在上罐生产之前需检测种子罐中菌体的纯度和浓度，不能有杂菌污染，浓度达到每毫升亿 级以上，发酵菌液pH<4.0。 5.3 培养基 5.3.1原菌种和一级菌种的培养基应保证菌种生长的延滞期短，生长旺盛，碳、氮源营养丰富。 5.3.2二级菌种培养基原则上为发酵培养基或接近发酵培养基。 5.3.3发酵培养基在保证菌体生长旺盛的前提下，尽量利用来源充足、价格低廉的原料。 5.4 灭菌 5.4.1液体发酵，发酵罐的装液量60%.70%，液体培养基、发酵设备、管道、补料罐等采用高压蒸汽 灭菌，灭菌条件为 115 °C.121°C，0.1 MPa.0.15 MPa，灭菌 20 min.30 min。 5.4.2 固体物料含水率为50%±5%，灭菌条件为115 C.121 C，0.1 MPa.0.15 MPa，灭菌1.0 h. 1.5 h。 5.4.3灭菌后无菌操作取灭菌后的培养基，制片，染色，镜检，无微生物说明灭菌彻底，若有，需重 复5.3的工作。 5.5接种 一级种子到二级种子接种量为3%.5%，二级种子到发酵罐接种量为5%.7%。接种时需要无菌操作， 调节进、排气阀（通入的气体为氮气或其它惰性气体），使接种口有气体排出。 5.6发酵 5.6.1乳酸菌的发酵温度控制在25 C.35 C。 5.6.2发酵过程中不通气，或通入氮气，搅拌转数50 r/min.100 r/min。 5.6.3当有效活菌数达到每毫升十亿级，并pH降低到4.0以下，结束发酵。 5.6.4发酵周期为24 h.48 h。 5.7发酵后处理  发酵后的液体菌剂、固体菌剂密封包装，包装容器经过灭菌处理。 6质量检测 6.1检测指标 每个批次的产品抽样检测包括感官、水分、pH、有效活菌数和杂菌率等指标，检验合格方可出厂。 6.2感官检测 6.2.1取菌液250 mL (或固体菌剂250 g)于无色玻璃杯中，采用目测、鼻嗅的方法进行检验。 6.2.2菌液为浅棕至深棕色的悬浊液，有特殊的酸香味。固体菌剂因培养基原料不同呈现不同颜色， 有特殊的酸香味。 6.3 pH测定 按GB 20287执行。 6.4有效活菌数检测 乳酸菌有效活菌数的测定按GB 20287规定检测。 6.5杂菌率的测定（好氧或兼性厌氧杂菌） 从用来测定有效活菌数且己经过10倍系列稀释的样品中，选取3个稀释度（10-5、10-6、10-7)进行 杂菌率测定。平板计数法，按GB 20287操作。 6.6固体菌剂水分含量测定 按GB 20287执行。 7储运 7.1应贮存在通风、干燥、清洁的仓库，仓库内无有害气体、易燃易爆物品及腐蚀性化学物品，远离 热源。 7.2长途运输时，防止日晒、雨淋，避免长期受压和机械损伤，产品不应和易燃、易爆、易腐蚀的物 品同车（或其他运输工具）装运。  附录A (规范性附录） 乳酸菌生产技术流程图 图A.1乳酸菌生产技术流程图 。。。。。。以下内容略