,产 第一部分:毛囊单位体外保存后的活性 第一章实验材料和主要方法 第一节标本收集和预处理..........................................10 第二节毛囊分离和保存.............................................12 第三节毛囊细胞培养................................................14 第四节毛囊单位的裸鼠移植...............................................16 第二章保存温度对毛囊单位活性的影响 第一节保存于26e和4eRinger液时的活性比较 第二节保存于0e和4eRinger液时的活性比较 ............ 20 ............. 27 第三章保存液对毛囊单位活性的影响 第一节保存于0eRinger液和DMEM时的活性比较二...39 第二部分:毛发延期移植在临床的初步应用 病例报告:.......................................................,..........52 五 第三部分:报告相关综述 综述一:毛囊的体外保存和延期移植.....................................57 综述二:毛发游离移植术.........................................../.64 附件 附件 致谢 1:动物实验设施使用证明和实验动物质量合格证....................72 2:发表的报告〔第一作者)........................................-73 .!.............................................. ,......................................................74 - 了z了 _ 少中国协和医科大学博士学位报告 一飞之边-J~曲 月叮舀 入 尹 雄激素性秃发是皮肤科的常见疾病白种人中,有约5%0的男性 存在不同程度的早秃;在我国,有调查显示25一55岁的男性中其患病 率约为27%(22一40%,视城市而定)由于本病的发生主要开始于 20一30男性,而头发又是一个人健康!年轻和活力的象征,所以容 易给患者造成较大的心理压力,其治疗愿望迫切川 目前对雄激素性秃发的治疗主要有药物治疗!佩戴假发和自体毛 发移植药物治疗如口服非那雄胺F(niasteride)或外用2一%5的米诺 地尔(Mnixodi)li等,对早期轻!中度患者有一定疗效,但停药后新 生发仍可脱落,而且药物存在一定的副作用对晚期病例,药物治疗 缺乏疗效 以毛发移植治疗秃发很早就有报导,但其真正被引起重视的是 Oernrtelhc(1959年)报道用于雄激素性秃发的治疗之后目前,以 毛囊单位作毛发移植已使得手术效果较以前的移植方法有较大的改 观;因为它使用了更小的移植物(每个移植物只含1一3根毛发),移 植后的结果更加接近头皮毛发的自然形态,避免了过去那种以2一4 mm的/标准移植物0(每个移植物含10一20根毛发)移植后的不自 然簇状毛发只要设计合理,毛囊单位毛发移植术可使绝大多数受术 者满意(95%以上)= 但很显然,和其它移植方法相比,该手术方法更费时间并且须有 手术显微镜或解剖显微镜等设备来分离毛囊单位移植物分离和植入中国协和医科大学博士学位报告 一千个左右这样的移植物约需4位手术者连续工作4一6小时=3其 中移植物的分离占了主要时间为了保证移植后的成活率,医生努力 缩短移植物在体外的时间,工作压力较大,而且许多毛囊也因操作的 匆忙而损伤;另一方面,医生在制作移植物时病人也要在手术室等候 较长的时间/.如想一次植入三千个左右这样的移植物以获得较大 的移植密度,或者当诊所的人员和设备有限时,那么问题就更加突出 一种设想是,如果毛囊单位能在体外特定环境下被保存较长时 间,并且移植后不明显影响其成活率,那么可开展所谓的延期毛发移 植术即可先将供区头皮切下,让助手在较充裕的时间内分离所需移 植物,并将之保存在一定的环境中备用然后,在适当的时候让患者 回来,由手术医生将之植入这样每次手术只需一小时左右完成川 这样做的意义有:1)可让医生有较充裕的时间在显微镜下仔细分离 移植物,使毛囊分离时的损伤率最小;2)使单次移植大量毛囊单位 (3千个左右)成为更加可能,只要患者有足够的供区毛发;3)对 医生数目的要求降低,1一2个医生也可开展此术;4)使设备有限的 诊所有可能借助于其它医院的设备而开展此术;5)医生和患者的压 力可明显减小;6)多余的毛囊可以在一定的时间内备用 临床上,在4e下保存皮肤移植物供延期移植是经常应用的,而 且移植物可在冰箱中被保存2周以上-4]但和皮肤移植物相比,毛 囊的结构更为复杂,它是一个由表皮一间质复合体构成的微型器官 所以毛囊在体外保存较长时间后能否可以象皮肤那样保持活性有待 实验证实中国协和医科大学博士学位报告 l 益了 夕 在影响毛囊体外保存的诸多因素中,保存温度和保存液是其中较 重要的因素 对于温度,在日常的毛发移植手术中,一般也要求将头皮和毛囊 移植物暂时保存于低温的环境(1一4e)以降低其体外代谢,保证移 植后的成活率RPaosoi等-5.曾以毛囊器官培养的方法比较了毛囊分 别保存在1e和室温下(26e)5小时后的活性,结果成活率分别为 87%和88%,没有明显统计学差异,提示如毛囊离体时间少于5小时, 就没有必要作常规的低温保存但很显然,这个离体保存的时间较短; 随着体外保存时间的延长,温度对毛囊活性的影响应当会逐渐表现出 来 关于毛囊低温下较长时间体外保存的研究报道罕见Kurata等/. 对在4e保存不同时间后的毛囊以细胞培养(毛乳头及外根鞘细胞)和 毛囊器官培养的方法对其活性进行了评估结果保存7天后的毛囊也 有部分可被培养出细胞有趣的是,他们还将保存了7天的10个毛 囊接种到裸鼠体内,5个月后有6个毛囊成活这提示毛囊的体外长 期保存和延期移植是有一定可能的遗憾的是,他们在裸鼠中植入的 毛囊数目太少,其结果缺乏代表性 对于保存液,Kurata等/.比较了单个毛囊分别保存于生理盐水! HankS液!DMEM和RP随一1640中不同时间后的活性结果毛囊在保 存24小时后再作器官培养时,80一100%的毛囊有继续生长的现象, 而且生长速度接近正常毛发;但毛囊在保存48小时以上后再作器官 培养时,绝大多数毛囊不再有生长现象实验没能得出结论哪一种保_ 中国协和医科大学博士学位报告 存液较理想 上述文献中,保存后毛囊的活性主要依据毛囊的细胞培养和器官 培养,而且其结果有较大的不同,特别是在不同方法之间;更重要的 是,它们均为体外实验,其结果尚有待体内实验加以评估和验证 为此,我们拟在国!内外相关研究的基础上,以裸鼠移植的方法 为主,从保存温度和保存液两个关键因素对毛囊单位的体外保存作进 一步的探讨,为开展延期毛发移植的可行性提供实验依据