中成药的质量长期以来多以单一指标进行控制,但中药的多成分、多靶点的 作用特点决定了对其进行多指标质量控制的必要性,因此多成分同步测定的质量 控制模式应运而生。但商品化对照品的供需矛盾和多指标质量控制所致的高昂的 检测成本限制了该质量评价模式在中药实际的生产、科研和监管领域的推广和应 用。“一测多评”(简称为QAMS)的中药质量评价模式为解决该矛盾提供了新 思路。 栀子金花丸的功效是清热泻火,凉血解毒,可用于口舌生疮,牙龈肿痛等月市 胃实热症,是常用的中药复方制剂。现行2010年版《中国药典》一部含量测定 项下仅以栀子苷一个指标成分对其进行质量评价。现将一测多评的质量评价模式 应用于栀子金花丸,探索该方法应用于中药复方的可行性,使多成分质量控制方 法用于中成药质量控制,提高其质量控制水平,进一步保证药物的安全、有效、 可控,并尽量降低检测成本。 一、栀子金花丸中三类成分的含量测定 采用HPLC法,建立对栀子金花丸中3种不同类型的10个成分(小檗碱、 黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、汉黄芩素、大黄酸、大黄素、大黄酚 和大黄素甲醚,分别用字母AJ代表该10个成分)的含量进行同步测定的方法。 采用SyncronisCi8 (4.6 mm x 250 mm, 5 pm)色谱柱,流动相为甲醇-乙腈-0.2% 磷酸水,梯度洗脱,流速lmLmin_1,柱温30 °C,分别在同一波长(254 nm) 和不同波长(228nm、274nm、254nm)处同时检测。经过系统的方法学考察, 其精密度、线性、稳定性、重复性、加样回收试验均符合中药成分含量测定的要 求。实验结果表明两种检测波长模式下该方法分离度好、无杂质干扰、简便、准 确,可用于栀子金花丸中上述10种成分的含量测定。 二、梔子金花丸中三类成分QAMS质量评价模式的建立 1、采用PDA型检测器,以大黄素为内参物,通过斜率法,分别于两种不同 检测波长模式下,即同一波长(254 nm)和不同波长(228 nm、274 nm、254 nm) 处检测,测定了其他9个待测成分小檗碱、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大 黄素、汉黄芩素、大黄酸、大黄酚和大黄素甲醚与内参物大黄素间的相对校正因 子(Relative Correction Factor,RCF)。在254nm波长处检测时,最终确定的 ] 中国中医科学院二〇一一级硕士研究生学位报告 RCF 分别为:f / xm = 1.01、f / 大黄素=0.427、f 孟為苷 / 大黄素=0.541、 /254nm _ /\ 00^7 -f 254細 _ 1 on -f 254nm _ A -f 254nm — 1 OO 黄茶素/大黄素~ U.55/N/芦荟大黄衆/大黄萦—l.jy、/汉黄芩衆/大黄素~ U./yj N/大黄酸/大黄素一1乂2、 f :fc_/:#cf=1.48、f / =1.01。在不问波长处检测时,最终确定的RCF /V 13| >f . /228nm/254nm 一 * ^ r- 274nm/254om 一 f\ a 274nm/254nm 一 -t \ -t /* 274nm/ 254nm _ TTMy^ij小檗《/大黄衆=黄芩苷/大黄素=u.yy、/汉黄芩苷/大黄素-i.u、/黄芩素/大黄素= 1 /254nm/254nm _ 1J 274nm/2S4nra 一 -t n r 254nm/2S4nm 一 * n r 2S4nm/2S4nm _ 1.01、/声基大黄素/大黄素=uy、/汉黄芩衆/大黄素大黄酸/大黄素=m J大黄粉/大黄素= 1-48> =l-00o通过对RCF进行重复性和耐用性试验,证明在确定 的色谱条件下,上述RCF可作为一个常数用于栀子金花丸中小檗碱、黄芩中黄 酮类和大黄中游离蒽醌类成分的含量计算。 2、本实验对栀子金花丸中10个待测成分的定位方法一保留时间差(ATr) 和相对保留值(及7>),进行了耐用性考察,最终确定了根据保留时间差并借助化 合物的紫外吸收光谱和栀子金花丸“一测多评”特征图谱进行定位的方法。最终 确定的分别为:z/^a/H=-50.35 min、/1^^=-42.36 min、z^c/H=-34.42 min、 J^d/h=-27.75 min、J/e/h=-19.68 min、」&F/H=-17.73 min、」^G/H=-13.05 min、 如i/h=10.34 min、為抓=16.23 min。 3、对 9 种 C!8 填料色谱柱(Spursil、Welchrom、Syncronis、Luna、Topsil、 Diamonsil (II)、AccurasiK Xtimate、Kromasil )考察了时间校正法对待测成分 色谱峰的定位效果。选择校正点(n22)时,其中之一必须为内参物。在运用该 法对待测成分色谱峰定位时,由于10个待测成分为3种不同类型化合物,因此 在实际应用时,可根据现有对照品的情况灵活应用。试验中发现,校正点的增加 并未使定位结果的准确性得到相应提高,采用大黄素和小檗碱进行二点校正,定 位效果较好。在采用该法进行待测成分定位的同时,若结合待测成分的紫外吸收 光谱和栀子金花丸的标准图谱会使定位准确度得以大幅提高。 4、将建立的栀子金花丸中生物碱、黄酮、蒽醌3类成分QAMS方法用于栀 子金花丸的质量评价,并将QAMS法的计算值和与外标法的测定结果进行比较, 二者无显著性差异,相对误差<5%。 研宄结果表明:“一测多评”质量评价模式可以应用于栀子金花丸中3种不 同类型化合物的多指标同步质量评价。